黑曲霉内切葡聚糖酶AnCel5A的表达纯化与晶体优化

doi:10.3969/j.issn.1673-1689.2019.02.012

首页 > 过刊浏览>2019年第38卷第2期 >81-86. DOI:10.3969/j.issn.1673-1689.2019.02.012

黑曲霉内切葡聚糖酶AnCel5A的表达纯化与晶体优化
DOI:
                        10.3969/j.issn.1673-1689.2019.02.012
                    
CSTR:
                        [cstr]
                    
作者:
                        
                        
                    
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中图分类号:Q71
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Expression，Purification and Crystallization of a Glycoside Hydrolase Family 5 Endoglucanase（AnCel5A） from Aspergillus niger

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来源于黑曲霉（Aspergillus niger）的β-1，4-内切葡聚糖酶（AnCel5A）是糖苷水解酶第5家族成员，水解纤维素分子无定形区的β-1，4-糖苷键，在纤维素的降解过程中发挥关键作用。本研究通过对AnCel5A的结晶条件初筛，获得并优化AnCel5A晶体以期解析其蛋白质晶体结构。将截去N端信号肽的AnCel5A蛋白在Pichia pastoris X33/pPICZαA中进行表达，发酵液上清透析除盐并进行Endo H去糖基化酶切，后续依次通过离子交换层析、疏水层析，获得高纯度蛋白。通过坐滴气相扩散法对AnCel5A的结晶条件进行初筛，在CryoI screen kit （A6）孔中长出了初始晶体，经优化获得了更好的晶体。蛋白晶体于台湾新竹同步辐射中心（NSRRC）BL15A1线站进行了X射线衍射数据收集，结果显示其分辨率达到1.8 ?。

Abstract:

The β-1，4-endoglucanase from Aspergillu sniger（AnCel5A） is a cellulase which is classified to glycoside hydrolases subfamily （GH） 5. It can hydrolyze the amorphous region of cellulose long chains by endo-action，which makes it one of the key enzymes in cellulose hydrolysis.This research aims at determination the crystal structure of AnCel5A by screening and optimization its protein crystals. The signal peptide truncated AnCel5A is successfully expressed in P. pastoris X33. Purified proteins are obtained by using ion-exchange and hydrophobic chromatography. The crystal screen of AnCel5A is completed by using sitting-drop vapor diffusion method and screen kits bought from the Hampton Research company. Initial crystals are found in the reservoir solution of cryoI kit （A6）. After further optimization，better crystals are obtained. The crystals diffracted to 1.8 ? and dataset is collected at beam line BL15A1 of the National Synchrotron Radiation Research Center （NSRRC，Hsinchu，Taiwan）.

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引用本文

颜俊杰,李玉洁,郑迎迎,陈纯琪,郭瑞庭,李华钟,刘卫东.黑曲霉内切葡聚糖酶AnCel5A的表达纯化与晶体优化[J].食品与生物技术学报,2019,38(2):81-86.

YAN Junjie, LI Yujie, ZHENG Yingying, CHEN Chunchi, GUO Reyting, LI Huazhong, LIU Weidong. Expression，Purification and Crystallization of a Glycoside Hydrolase Family 5 Endoglucanase（AnCel5A） from Aspergillus niger[J]. Journal of Food Science and Biotechnology,2019,38(2):81-86.

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