摘要:综述了适配体的筛选方法以及近几年来在分析检测、食品安全、临床医疗等领域的应用。适配体是一类能与靶分子高亲和力、高特异性结合的寡核苷酸单链。它可以通过指数级富集的配体进化技术(SELEX)从体外筛选而得。适配体类似于抗体而优于抗体,愈渐成为各种研究项目、检测方面等的重要课题之一。

摘要:综述了热加工处理对典型食物过敏原致敏性的影响,重点介绍了体外细胞学评价方法在评价食物过敏原致敏性变化方面的一些研究进展。人们生活方式和环境的改变,以及日常食物丰富所致过敏诱发因素的增加,食物过敏发生比例大幅提高,食品过敏问题已成为目前国内外食品安全研究的热点之一。食品热加工可以改变食物过敏原的蛋白表位结构、聚合特性以及过敏原诱发淋巴细胞释放细胞因子的特性。由于食品基质、配料和处理过程的差异,加工过程中食品致敏性的变化尚无普遍规律可循。通过对典型食物过敏原的分离纯化、分子鉴定,可以追踪过敏原组分在食物加工过程中的改变规律。目前过敏效应分子IgE抗体的水平变化常常被作为致敏性评价的指标,酶联免疫分析和免疫印迹试验是常用的测定手段。然而,对于过敏反应阶段由IgE抗体与效应细胞上FcεR受体之间的结合引发系列炎症反应的部分,则无法通过这些方法进行判断。全面评价食物过敏原的致敏效应不但需要监测IgE抗体水平,也需要监测效应细胞致敏程度,以及释放的细胞因子水平。

摘要:以原人参二醇型皂苷混合物为底物对10种霉菌进行筛选,发现3.26号菌株能够将高含量的原人参二醇型皂苷Rb1、Rb2、Rc等转化为具有抗肿瘤活性的稀有人参皂苷Compound K(C-K)。经形态学和ITS序列分析鉴定,该菌株属于附球霉属(Epicoccum)真菌。从该菌株培养液中分离出人参皂苷水解酶粗酶E-I,确定其最适pH值和最适温度分别为pH 5.0和40℃。用EI分别转化人参皂苷Rb1和Rb2、Rc,发现它既能水解人参皂苷Rb1,也能水解Rb2和Rc,但是对Rb1的水解活性更强。上述结果说明:3.26号菌株产生的糖苷酶具有广泛的底物专一性,但是对葡萄糖苷键的专一性更高;该菌的生物转化途径为人参皂苷Rb1、Rb2、Rc→Rd→F2→C-K。

摘要:研究了9种维生素对大肠杆菌Escherichia coli.JN8生长及其发酵产L-色氨酸产量的影响,并对发酵培养基中的维生素浓度进行了优化。结果表明,低浓度肌醇和叶酸可显著促进大肠杆菌的生长及L-色氨酸的合成,叶酸和肌醇的最适添加量分别为0.000 2 mg/L和0.2 mg/L;较高浓度的生物素可以明显促进菌体生长及色氨酸的合成,其最适添加量为0.12 mg/L;较低浓度VB6的添加严重抑制色氨酸的合成,当其质量浓度增至0.8 mg/L时,菌体浓度和色氨酸的产量均较对照有显著的提高,分别提高11.8%和27.2%。添加VB5可略微提高色氨酸的产量,最优质量浓度为0.4 mg/L。添加VB1、VB2、VB3和VC虽然对菌体的生长均有较强的促进作用,但对于色氨酸合成却有不同程度的抑制作用。

摘要:采用单因素研究了VB1,VB3,VB6,VB12,生物素5种B族维生素对裂殖壶菌Schizochytriumsp.JN-168发酵产DHA的影响。实验表明:适量地添加5种维生素中的任一种均可提高DHA的产量,5种维生素的最适的质量浓度分别为0.1,0.005,0.005,0.3,0.05 mg/L,在各自最适的质量浓度下,VB12对DHA产量的提高效果最好,VB6和VB3次之,生物素和VB1最差。将5种维生素以最适的质量浓度同时添加到发酵培养基中可以大幅度提高DHA产量,与对照相比提高了53.8%,亦远高于添加单一维生素的效果。

摘要:为了明确能使人脑纳肽(Brain Natriuretic Peptide)保持活性的适用缓冲溶液条件,采用常规离体血管灌流实验,观察人脑纳肽的不同缓冲溶液对家兔离体兔胸主动脉血管片段舒张功能的影响。研究发现,在以柠檬酸/磷酸氢二钠为基质的缓冲液条件下,BNP在10-8~10-5mol/L浓度区间对家兔血管舒张均呈良好的剂量依赖关系,而以醋酸/醋酸钠或磷酸氢二钾/磷酸二氢钾为基质的这两种缓冲液虽有一定的舒张效果,但没有剂量依赖关系。由此表明,在合适的pH条件下(4或5),柠檬酸/磷酸氢二钠缓冲液具有作为改进BNP注射剂处方的潜在价值。

摘要:提出了一种基于嗅觉可视化技术的猪肉中主要致腐菌的检测方法。在室温(20℃)、冷藏(4℃)和冷冻(-16℃)3种贮藏条件下,精心挑选了4种卟啉化合物组成可视化传感器。将该可视化传感器分别检测染有3种主要致腐菌(韩国假单胞杆菌、热杀索丝菌、梭状芽胞杆菌)的猪肉样本,用图像处理技术分析可视化传感器与猪肉样本挥发性气体反应前后的颜色变化,并利用主成分分析法提取不同猪肉样本挥发性气味的特征信息,用于猪肉中上述3种主要致腐菌的区分。检测结果显示,嗅觉可视化技术对染有韩国假单胞杆菌样本组的识别率为98%,对染有梭状芽孢杆菌和热杀索丝菌样本组的识别率均为100%。研究结果表明,嗅觉可视化传感器阵列能够区分猪肉中的上述3种主要致腐菌。

摘要:在大肠杆菌中重组表达了S-腺苷甲硫氨酸合成酶,然后以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,对酶进行固定化研究。结果表明,最佳固定化条件为:壳聚糖质量浓度为2.5 g/dL、戊二醛体积分数为0.8%、固定化酶量为6 mg/mL、固定化时间为12 h,该条件下所得固定化酶活性回收率为76%,固定化酶热稳定性较好,在55℃下保温5 h仍保留53%的活力,而游离酶在50℃下保温5 h则完全失活。固定化酶在碱性溶液环境的稳定性较高,在pH 7.5~9.0的缓冲液中4℃保温10 h酶活性仍保留80%以上。将固定化酶用于S-腺苷甲硫氨酸的合成,连续反应5批次后,酶活性仍保留64%。在底物三磷酸腺苷(ATP)浓度为30 mmol/L的条件下,固定化酶催化底物ATP的转化率超过95%。

摘要:采用碱提的方法从杏鲍菇中提取得到水溶性粗多糖PEAP,并经DEAE-52纤维素和SephadexG-150柱层析法分离纯化,获得一种新的杏鲍菇多糖组分PEAP-1。通过HPLC、GC、IR、刚果红实验、原子力显微镜(AFM),以及环境电镜扫描(SEM)分析方法,研究了PEAP-1的结构形貌。HPLC和GC结果表明,PEAP-1为均一多糖,相对分子质量为450 kDa,单糖基由葡萄糖和半乳糖组成,其摩尔比为16.9∶0.37。在红外光谱图中,832 cm-1和919 cm-1附近出峰,表明在PEAP-1中存在吡喃糖环结构。刚果红实验和AFM图像显示,PEAP-1的多分支结构中没有三股螺旋构型,单个分子呈无规则链状,直径在0.13~1.2 nm之间。同时,在SEM检测下PEAP-1呈片状、杆状和网状形貌。

摘要:研究了石榴皮多酚纯化物、安石榴苷和石榴鞣花酸对脂变L-02肝细胞胆固醇合成限速酶HMG-CoA还原酶mRNA表达的影响;采用MTT法筛选石榴皮多酚适宜浓度;体积分数50%胎牛血清的RPMI-1640培养基与L-02肝细胞孵育48 h建立脂肪变性肝细胞模型;实验分为正常组、模型组和治疗组,治疗组加入不同浓度的受施物,继续培养48 h,采用RT-PCR法检测不同受施物对脂变L-02肝细胞HMG-CoA还原酶mRNA表达的影响;结果显示:石榴皮多酚均能呈剂量依赖性地减弱脂变L-02肝细胞mRNA表达,且以100μg/mL的安石榴苷标品抑制作用最强;表明石榴皮多酚降肝细胞总胆固醇作用是通过降低HMG-CoA还原酶mRNA表达实现的,安石榴苷是石榴皮多酚中降血脂的主要活性形式。

摘要:将TAT-Oct4目的基因插入pET28a表达载体,构建重组表达质粒pET28a-TAT-Oct4,形成大肠杆菌重组表达体系。融合蛋白TAT-Oct4在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,表达产物经纯化后,纯度可达90%以上。通过尿素梯度透析复性,TAT-Oct4平均复性收率为8.8%。细胞免疫荧光技术分析表明,TAT-Oct4融合蛋白可穿透近100%细胞的细胞膜,其进膜后主要分布于细胞核内。建立了具有活性的TAT-Oct4融合蛋白生物制备方法,为细胞重编程提供了一种有效的研究材料,并可为其他用于细胞重编程的干细胞转录因子设计提供实用的方法学。

摘要:对产于西藏的滇结香花选取极性大小不同的正己烷、石油醚、乙酸乙酯、甲醇、水依次进行提取;建立体外α葡萄糖苷酶抑制模型,对提取物进行活性评价;选择活性较高的组分进行小鼠急性毒性及对高血糖模型小鼠降糖作用评价。结果显示,滇结香花水提物(EMW,1 000 mg/kg)对酵母和大鼠来源的α-葡萄糖苷酶均具有较好的体外抑制活性,活性高于阳性对照阿卡波糖。EMW并未发现明显的毒副作用,EMW中高剂量(每千克体重用药量)200 mg/kg和300 mg/kg给药对小鼠高血糖模型具有良好的降血糖作用。研究表明,EMW具有较好的α-葡萄糖苷酶抑制及体内降糖活性。

摘要:应用近红外光谱技术无损检测莲藕的淀粉含量。对光谱数据的3种预处理方法进行了比较分析,再采用偏最小二乘法(PLS)和联合区间偏最小二乘法(SiPLS)建立了莲藕淀粉含量的近红外光谱分析模型。研究结果表明,经多元散射校正、一阶导数和平滑等结合的预处理,采用联合区间偏最小二乘法(SiPLS)建立的模型最佳;其校正集的相关系数(Rc)和均方根误差(RMSEC)分别为0.960 0和0.741 6,预测集的相关系数(Rp)和均方根误差(RMSEP)为0.923 8和1.050 6,可以满足实际应用要求。结论:利用近红外光谱技术对莲藕淀粉含量进行无损检测切实可行。

摘要:从石楠叶片提取分离红色素,研究其稳定性、抗氧化性和抑菌性。结果表明:石楠叶片红色素耐pH小于4的酸性和60℃以下温度,并具有一定的耐光性。它能有效清除系统中的羟基自由基和超氧阴离子,且清除效果与红色素质量浓度正相关。在石楠叶片红色素质量浓度为0.32 mg/mL时,对羟基自由基和超氧阴离子的清除率可分别达到89.66%和74.71%。石楠叶片红色素的抑菌性从大到小依次为大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌,且质量浓度越大,抑菌性越强。石楠叶片红色素具有一定的稳定性、较强的抗氧化性与抑菌性。

摘要:通过建立裸鼠淋巴瘤细胞Jurkat模型,对桦褐孔菌多糖IOP3a的体内抗肿瘤活性及其机制进行了研究。实验结果表明,IOP3a高、中剂量组瘤重与阴性对照组相比均有显著性差异(p<0.05),肿瘤抑制率分别为69.28%和57.62%,具有明显的剂量-效应关系。随着剂量的增加,脾脏指数有逐步增加的趋势,具有升高裸鼠WBC和淋巴细胞的功能,同时对巨噬细胞产生的细胞因子TNF-α和L-1β均有明显的促进作用。组织病理学观察表明,IOP3a可使肿瘤组织中呈现明显的肿瘤坏死灶,瘤组织出现坏死的现象。免疫组化表明,IOP3a通过促进肿瘤组织细胞中Bax蛋白表达、抑制Bcl-2表达起到抗肿瘤作用。

摘要:用NBT光化还原法、Fenton反应法和钼酸铵显色分光光度法测定了甜荞(F.esculentum Moench)不同器官(根、茎、叶和花)水提液体外抗羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(·O2-)和过氧化氢(H2O2)的能力。结果表明:甜荞不同器官水提液体外均能抗·OH、·O2-和H2O2。抗·OH的能力排序为:茎、花>叶、根;抗·O2-的能力排序为:花>叶、茎>根;抗H2O2的能力排序为:叶、花>根、茎。

摘要:采用新型双水相体系对桔皮中橙皮苷进行分离、纯化研究,考察了粗提物用量、pH、温度等参数对橙皮苷在两相间的分配及其回收率的影响。首先选取2种低分子有机物及3种无机盐分别构成双水相体系,用浊点法对其成相性能进行研究。选取其中成相性能较好的物质构成双水相体系,对橙皮苷的乙醇粗提物进行双水相分离,考察体系及其成相浓度对橙皮苷分配系数的影响。用所得最佳体系——丙酮-K2HPO4双水相体系对桔皮中橙皮苷进行分离。最佳条件下,橙皮苷的萃取收率可达96.69%。采用制备型HPLC对其进一步纯化,梯度洗脱时分离效果较好。经测定,双水相体系纯化后,橙皮苷样品纯度约为71.36%。经制备型HPLC精制所得橙皮苷纯度为96.09%。橙皮苷总回收率为83.54%。

摘要:研究丁香提取物对由H2O2引起的人肝细胞HL770氧化损伤的保护作用及其机制。采用H2O2诱导建立细胞氧化损伤模型,通过测定细胞抗氧化酶活性、丙二醛、过氧亚硝基阴离子等指标,分析探讨丁香提取物对细胞损伤的保护作用。结果显示丁香水提取物和乙醇提取物可以剂量依赖性地提高细胞内的SOD、CAT和GSH-Px酶活性,降低氧化产物过氧亚硝基阴离子和丙二醛含量。表明丁香提取物可通过提高HL7702细胞内抗氧化酶活性和降低氧化产物的含量减轻细胞受到的氧化损伤。