摘要:酵母提前絮凝是啤酒企业时有发生的现象,因其复杂的影响因素至今对酵母提前絮凝的发生机理及提前絮凝因子的本质没有明确的证实,也因此给整个啤酒酿造产业链造成了极大的困扰。近年来,随着环境污染及各种恶劣天气的出现,导致啤酒酵母提前絮凝发生相对增多,对麦芽企业及啤酒企业造成一定经济和名誉损失。作者综述了啤酒酵母提前絮凝的国内外最新研究进展,包括机理假说、提前絮凝因子的来源、形成机制及控制研究,以期对啤酒产业链提供有效解决酵母提前絮凝的思路和方法。

摘要:为更好的了解酿造原料的香气物质,作者对以非挥发性前体形式存在的结合态香气物质进行了分析。通过萃取、旋蒸、固相萃取(SPE)得到香气物质前体,水解后结合态香气物质从前体释放,结合顶空固相微萃取(HS-SPME)与气象色谱-质谱(GC-MS)进行香气成分分析。作者对高粱、玉米、大麦、小麦、糯米、大米等6种酿造原料进行了分析,共检测到35种结合态香气物质,其中醇类4种,酯类3种,醛酮类10种,酸类6种,芳香族类4种,萜类6种,杂环类2种。

摘要:通过对镰刀菌发酵所产色素的分离及结构的分析,筛选其抗肿瘤的活性成分。采用形态与分子生物学方法对镰刀菌株鉴定,利用HPLC的对该菌株发酵所产的色素进行分离,分离的产物用紫外、红外、核磁进行结构鉴定,使用MTT的方法筛选抗肿瘤的活性成分。结果表明:该镰刀菌所产色素共6个不同的峰,相对分子质量均在380左右,其中VI号峰结构新颖,为花青苷类色素,分子式为C17H18O10,能抑制A539、MCF-7、MKN-45、HepG2、SW620五种不同肿瘤细胞的增殖,并呈现浓度的依赖性,其中MCF-7乳腺癌细胞抑制最明显(P<0.01),故VI号峰色素可能是一种很有前景的防治乳腺癌的化合物。

摘要:为考察人体肠道菌群对大豆皂苷Ⅱ的体外代谢转化作用,在牛脑牛心培养液(BHI)和磷酸盐缓冲液(PBS)两种离体模型下,研究了大豆皂苷Ⅱ在48 h内被肠道菌群代谢转化过程,并用HPLC/MS系统对其转化产物进行分析鉴定。结果显示,大豆皂苷Ⅱ先被菌群酶转化为大豆皂苷Ⅳ,在48 h被最终转化为大豆皂苷元B,表明大豆皂苷在肠道微生物作用下,其糖基被逐步水解生成相对分子质量更小、疏水性更强的代谢物。

摘要:在单因素优化的基础上,采用响应面分析方法对重组大肠杆菌生产精氨酸脱亚胺酶(ADI)的发酵培养基进行了优化。借助于SAS软件,结合Plackett-Burman和Box-Behnken实验设计对5种培养基组分进行优化。结果表明,最佳培养基组分为胰蛋白胨11.16 g/L,酵母提取物20 g/L,甘油6.3 g/L,磷酸氢二钾16.38 g/L,磷酸二氢钾2.31 g/L。采用优化后的培养基进行摇瓶发酵,ADI酶活达到5.7 U/mL发酵液,比初始培养基(3.72 U/mL发酵液)提高了1.53倍,比LB培养基(2.83 U/mL发酵液)提高了2.01倍。采用优化后的培养基在3 L发酵罐中进行发酵,ADI酶活达到15.17 U/mL发酵液,较LB培养基(4.32 U/mL发酵液)提高了3.51倍。

摘要:为了实现过氧化氢酶的工业化生产,作者对实验室前期构造成功的B. subtilis WSHDZ-01 (pSTOP1622-katA)进行了3 L发酵罐的发酵验证,并且通过数据分析优化了碳氮源浓度,使得过氧化氢酶酶活达到35 398 U/mL,比优化前提高53.41%。在此基础上,分别进行了24 L发酵罐和500 L发酵罐的放大实验,最高酶活分别达到28 940、23 190 U/mL。结果表明,该过氧化氢酶在产酶水平上已经达到工业化生产需求,为更大规模的工业化生产奠定坚实的基础。

摘要:华根霉(Rhizopus chinensis CCTCC M201021)是从我国传统微生物载体--大曲中分离筛选得到的一株丝状真菌,具有重要的工业应用前景。为建立一种适于华根霉胞内蛋白质的双向电泳体系以进行蛋白质组学研究,作者对华根霉胞内蛋白质的提取方法及双向电泳流程相关参数进行了考察和优化.确定采用液氮研磨与高速珠磨相结合的方法对华根霉进行细胞破碎,用TCA/丙酮对提取的蛋白质进行纯化,采用被动水化的上样方式上样,24 cm、pH 4~7的线性IPG胶条,上样量为1 200 μg蛋白质,考马斯亮蓝G-250胶体染色法,最终得到了背景清晰、分辨率高的双向电泳图谱。

摘要:卤代醇脱卤酶可以催化合成具有光学纯的环氧化物及β-取代醇等高价值手性药物中间体。作者所在实验室利用宏基因组技术从无锡新区工业集中地污染土壤中筛选了一段编码基因Y,经测序知其片段包含有765 bp的核苷酸,编码254个氨基酸。经Blast软件分析,其氨基酸序列与来自根癌土壤杆菌 (Agrobacterium tumefaciens)的卤代醇脱卤酶HheC同源性为81%,且含有卤代醇脱卤酶类的保守催化三联体Ser132-Thr145-Arg149。推测其属于卤代醇脱卤酶HheC类,命名为SyHheC。根据大肠杆菌Escherichia coli BL21的密码子偏爱性,对基因Y进行密码子优化和人工合成,命名为SyhheC,构建重组表达质粒pET28a-SyhheC,转化感受态E. coli BL21,表达产物经镍柱亲和层析后获得电泳纯的重组卤代醇脱卤酶reSyHheC。SDS-PAGE分析,reSyHheC的相对分子质量为34 000。以2-溴-1-(4-硝基苯基)-乙醇为底物,reSyHheC催化底物产生2-(4-硝基苯基)环氧乙烷的比活性为5.2 U/mg。

摘要:利用化学键法制备沙门氏菌捕获富集用免疫磁球,通过平板培养计数法确定其对目标菌的捕获率,对影响免疫磁球性能的磁分离时间、目标菌捕获率、特异性及敏感性等主要因素进行了研究。结果表明,免疫磁球在不同的磁分离时间内对目标菌的捕获率不同,在一定的的磁分离时间内捕获率达到最高；磁球与抗体的投料比影响免疫磁球的捕获性能,磁球200 μg、抗体25 μg的投料制备的免疫磁球能获得40%以上的捕获效率,具有一定的灵敏性(100 cfu/mL的目标菌捕获率为50%以上)；免疫磁球的粒径影响其捕获性能,大粒径(1 000 nm)免疫磁球目标菌捕获率小于小粒径(180 nm)免疫磁球目标菌捕获率；免疫磁球对单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌非特异性在10%以下,在一定程度上影响免疫磁球的特异性捕获。

摘要:为了优化革兰氏阴性棒状杆菌(Sphingomonas sp.)生产的发酵过程,对该菌发酵生产威兰胶分批发酵动力学进行了研究,利用数学建模方法得到了描述该菌株在7 L发酵罐中菌体生长、威兰胶合成和氮源消耗动力学数学模型。实验和模型数据的比较结果证明,该模型计算值与实际结果拟合良好,为其应用在威兰胶的放大工业化生产提供了依据。

摘要:从风干香肠中分离得到一株生长良好的乳酸菌ORC4,菌株能产乳酸、革兰氏染色阳性、接触酶阴性。经系统发育分析,结合菌落形态、细胞形态、生化反应试验,确定菌株ORC4为绿色魏斯氏菌。绿色魏斯氏菌ORC4的完整和破碎细胞对O2-·、DPPH·和·OH的清除率都与细胞浓度呈正相关。在细胞浓度为5×108 CFU/mL时,菌株ORC4破碎细胞对O2-·、DPPH·和·OH的清除率都高于完整细胞,分别为45.17%、56.17%和54.01%。菌株ORC4还能清除培养基中最多为35.87 μg/mL的胆固醇,单位细胞干重的胆固醇清除率为19.89 μg/mg。

摘要:以三角帆蚌脏器为试验材料,以NaCl溶液为提取溶剂,研究三角帆蚌脏器糖蛋白的低温提取、分离及抗氧化活性。通过单因素试验和正交试验,确定三角帆蚌脏器糖蛋白最优提取条件为:提取温度4 ℃、NaCl溶液浓度0.3 mol/L、料液比1∶15、提取时间9 h。在此条件下,糖蛋白得率(以糖含量计)为(9.259±0.083)%,糖蛋白得率(以蛋白质含量计)为(3.763±0.107)%。提取液经硫酸铵分级沉淀得三个组分糖蛋白粗品。体外抗氧化实验表明,三个组分都具有清除超氧阴离子自由基和羟基自由基的能力,但清除能力不同。10%SDS-PAGE电泳后经考马斯亮蓝R250和PAS染色,表明3个组分含有不同的糖蛋白谱带。

摘要:采用超滤法、离子交换层析和凝胶过滤层析分离阿魏菇抗氧化多肽,研究其抗氧化性能。以胃蛋白酶-胰蛋白酶联合酶解阿魏菇多肽水解物为原料,采用超滤法分离阿魏菇水解液,使用10 000的超滤膜,将阿魏菇水解液分离成10 000以下的多肽组分和大于10 000的多肽组分,小于10 000的多肽组分的·OH自由基清除能力和DPPH·自由基清除能力较高。小于10 000的多肽组分经DEAE-32纤维素分离,得到3个洗脱峰,其中P3组分的羟基清除能力较高,达到50.22%。P3组分采用葡聚糖凝胶SephadexG-25分离,在220 nm处得到5个洗脱峰,组分P3-2的羟自由基清除最高,达到77.23%,具有较高的抗氧化活性,其相对分子质量大约为1 862。

摘要:真核细胞中大部分膜融合过程由SNARE蛋白介导,但其功能和调节机制尚未完全清楚。酵母孢子形成是研究囊泡融合机制包括SNARE蛋白的理想模型系统。在该过程中涉及t-SNARE蛋白Sso1,它是突触囊泡融合所需蛋白syntaxin 1A的同源物,两者SNARE区域有51%的同源性。尽管如此,将SSO1的SNARE区域完全替换成syntaxin 1A,而构建的嵌合体却无法回补sso1?驻突变的产孢缺陷。为了确定哪些残基为Sso1功能所必须,作者进行了嵌合体和突变分析,发现Sso1/syntaxin 1A嵌合体中syntaxin 1A 的SNARE区域的220位丙氨酸换成谷氨酸后获得产孢功能。另外,Sso1发生相应的突变-218位谷氨酸突变成丙氨酸后失去其功能。因此,218位谷氨酸残基为Sso1产孢功能所必须。

摘要:酿酒酵母葡聚糖是一种良好的免疫效应应答剂,但是不溶于水,这严重影响了它在食品、医药等行业中的应用。对酿酒酵母葡聚糖进行机械改性,显著提高了它的溶解性。随着机械强度和活化时间的增加,葡聚糖的溶解率从11%提高到37%。活化之后的葡聚糖的粒径明显变小,比表面积增大；微观形态结构规整性降低,表面呈现粗糙状。红外光谱分析证实,活化之后葡聚糖的主体化学结构没有改变,但羟基吸收峰位置向低频方向发生较大偏移,氢键键能降低,氢键相互作用减弱。这些变化有利于葡聚糖分子与水分子相互作用,提高酵母葡聚糖的溶解性。由此制备的水溶性葡聚糖具有良好的免疫活性,可以显著刺激巨噬细胞产生TNF-α、IL-6、NO,它们的分泌量分别是阴性对照组的29.3、28.3、5.6倍。因此机械活化是一种提高酿酒酵母葡聚糖溶解性的高效、简便、环保方法。

摘要:利用冬虫夏草头孢菌发酵生产胞外多糖,研究不同温度下对菌体生长和胞外多糖产量的影响。结果表明:26 ℃是菌体生长的最适温度,28 ℃是产物积累的最适温度。在此基础上,提出分阶段控制温度工艺。通过响应面法分析,得到优化方案为第一阶段温度26 ℃,变温时间17 h,第二阶段温度28.5 ℃,胞外多糖产量10.92 g/L,比28 ℃恒温培养提高了25.5%。

摘要:从灵芝深层发酵液中获得的灵芝胞外多糖,经硫酸化后其抑癌活性大幅提升。硫酸化后,灵芝胞外多糖的结构和构象都发生一定的变化。经单糖组成分析和光谱初步解析,硫酸化灵芝胞外多糖的单糖组成为鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,其摩尔比为9∶3∶2∶4∶48；其主链可能是以α-D-Gal(1→6)为主或混杂有α-D-Gal,Rha,α-D-Glc,α-D-Man以及Ara为侧链,其硫酸基团可能接在C-3、C-4、C-6 位上。硫酸化前灵芝多糖的构象主要为单螺旋结构,而修饰后呈三维螺旋结构,x-衍射亦证实其结构的有序变化。

摘要:根据NCBI中的黑曲霉天门冬酰胺酶基因asp序列(GI:145231287)设计特异性引物,从黑曲霉CICC2462基因组中扩增asp基因编码区,构建其黑曲霉表达载体pSZHG-Asp。通过农杆菌介导法转化黑曲霉,筛选以asp基因置换糖化酶基因glaA的同源重组转化子。对转化子的表达产物进行SDS-PAGE分析和酶活检测。获得8株在glaA位点发生基因置换的同源重组转化子,并对其中4株的上清液进行检测。SDS-PAGE结果显示,在42 000处有目的蛋白质条带,重组菌株的目的蛋白质表达量为185~417 μg/mL,发酵液最高酶活为21 111 U/mL。