• 2016年第35卷第5期文章目次
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    • 低血糖负荷食品研究进展

      2016, 35(5):449-456. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2016.05.001 CSTR:

      摘要 (393) HTML (0) PDF 1.03 M (1261) 评论 (0) 收藏

      摘要:糖尿病作为一种慢性代谢型疾病,在中国乃至世界范围内都受到越来越多的重视。作者综述了国内外糖尿病的发展趋势以及低血糖负荷食品的发展现状,简单介绍了低血糖生成指数食品原料(淀粉、蛋白质、脂肪及微量元素等)的研究进展,以及营养素组合、加工工艺及食用方式对餐后血糖水平的影响,以期为低血糖负荷食品的进一步开发提供参考。

    • 重组毕赤酵母生产凝乳酶发酵优化

      2016, 35(5):457-464. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2016.05.002 CSTR:

      摘要 (553) HTML (0) PDF 1.25 M (906) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了获得毕赤酵母生产凝乳酶的最佳发酵条件,分别从起始诱导OD600、甲醇诱导浓度以及pH等方面研究了P. pastoris GS115在3.6 L发酵罐中表达微小根毛霉来源凝乳酶的高密度发酵,以恒溶氧反馈调节补加甘油和甲醇检测流加控制器在线监测流加甲醇。结果表明,在重组P. pastoris GS115/pPIC9k-chy起始诱导,OD600和甲醇诱导体积分数分别为150和2.0%,诱导pH为5.0时,发酵96 h凝乳酶活达到最大,为1 870 SU/mL,此时对应的生产强度和产物得率均达到最高水平,分别为19.48 SU/(mL·h)和2.42 SU/mL,总蛋白质质量浓度为0.64 mg/mL,凝乳活性与蛋白质水解活性的比值(MCA/PA)为63.43。

    • 烟草节杆菌肌酸酶的高效异源表达与应用分析

      2016, 35(5):465-470. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2016.05.003 CSTR:

      摘要 (953) HTML (0) PDF 1.97 M (1105) 评论 (0) 收藏

      摘要:肌酸酶(CRE)是临床检测血液和尿液中肌酐的关键酶之一。作者成功地从烟草节杆菌23710(Arthrobacter nicotianae 23710)中克隆了CRE基因,并实现了CRE在Escherichia coli BL21(DE3)中的表达。经过硫酸铵分级沉淀、阴离子交换色谱、分子筛后得到了较纯的重组CRE,比酶活达到了20.25 U/mg。重组CRE对于螯合剂EDTA、表面活性剂(Tween20,和Triton X-100)以及常用的防腐剂NaN3有很好的耐受性。

    • 采用BP神经网络优化酱油固态酿造条件

      2016, 35(5):471-476. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2016.05.004 CSTR:

      摘要 (508) HTML (0) PDF 1.42 M (1445) 评论 (0) 收藏

      摘要:酱油是一种中国传统发酵调味品。酱油的生产机理主要利用米曲霉所产的蛋白酶分解原料蛋白质为氨基酸,通过后期发酵增香,经淋油、灭菌、勾调而成。作者研究了米曲霉产蛋白酶在不同温度、pH、盐分条件下的特性,并且利用BP神经网络对蛋白酶最佳作用条件进行了优化。结果表明:最佳作用条件为42 ℃,pH 7.0,盐度为0 °Bé。以该结果为基础,进行规模化实验。结果表明:车间试验发酵条件确定为温度42 ℃,全程盐度18 °Bé,加盐水比为1∶2,淋浇次数为3次/d。

    • 单增李斯特菌WaX12及其sigB缺失突变株在不同pH下生长动力学的比较

      2016, 35(5):477-484. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2016.05.005 CSTR:

      摘要 (451) HTML (0) PDF 1.44 M (1180) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了探究σB因子对单增李斯特菌(LM)的生长影响,比较了LM-WaX12及其sigma B缺失突变株在不同pH值下生长动力学的差异。作者运用重叠延伸PCR(SOE-PCR)和同源重组的方法构建缺失SigB基因的LM突变株WaX12-?驻sigB;利用sigB外围引物扩增其两侧片段鉴定突变株,并且通过修正的Logistic模型拟合两个菌株在不同酸碱度下(pH 5~9)的生长曲线,分析各生长参数之间的差异性。结果表明,单增李斯特菌sigB缺失突变株构建成功;WaX12-?驻sigB和WaX12在pH 5的环境下最大比生长速率μmax、延滞期λ与最大菌浓MPD-OD均存在显著性差异(P<0.05),而在中性和碱性环境下二者无明显差异。

    • 常压室温等离子诱变选育L-天冬酰胺酶高产重组菌

      2016, 35(5):485-491. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2016.05.006 CSTR:

      摘要 (466) HTML (0) PDF 1.27 M (1215) 评论 (0) 收藏

      摘要:以Bacillus subtilis WB600为宿主,构建了能分泌表达L-ASNase的重组菌,并通过常压室温等离子体诱变进一步提高了重组菌的产酶量。重组Bacillus subtilis WB600(pMA5- wapA -ansZ)发酵30 h,胞外酶活达到37.2 U/mL,表明L-ASNase在信号肽wapA介导下能分泌至胞外。在功率120 W、气流量10 L/min、诱变时间40 s的诱变操作条件下,对重组菌进行了等离子体诱变。突变株的酶活最高达48.4 U/mL,较诱变前提高30%。上述结果表明,常压室温等离子体诱变能有效提高重组菌产L-ASNase的酶活. 研究结果为L-ASNase的工业化生产提供了高效的生产菌株。

    • 嗜热裂孢菌木聚糖酶在毕赤酵母中的表达及酶学性质

      2016, 35(5):492-497. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2016.05.007 CSTR:

      摘要 (517) HTML (0) PDF 1.08 M (1324) 评论 (0) 收藏

      摘要:将优化后的来自嗜热裂孢菌的木聚糖酶基因在毕赤酵母中进行异源表达并分析了其表达产物的酶学性质。对来源于嗜热裂孢菌的木聚糖酶基因催化域进行密码子优化,人工合成优化后的木聚糖酶成熟肽基因xyl11M,构建重组表达质粒pPIC9K-xyl11M,将其经SalⅠ线性化后电击转化毕赤酵母GS115,经G418筛选得到重组工程菌GS115/xyl11M,甲醇诱导表达重组蛋白。表达的重组蛋白reXyl11M经SDS-PAGE分析,其相对分子质量约34 000,酶活性可达到105.3 U/mL,最适反应温度为70 ℃,并在30~75 ℃温度内较稳定;最适反应pH为6.0,在pH 6.5~7.5范围内稳定;Co2+、Ba2+、Cu2+、Li+对酶活性有强烈的激活作用,Fe3+有明显的抑制作用,其它金属离子及EDTA对reXyl11M酶活性影响不大。结果表明xyl11M成功在毕赤酵母GS115中实现表达,且reXyl11M的酶学特性优良。

    • 分泌表达苹果酸乳酸酶的大肠杆菌系统的构建

      2016, 35(5):498-503. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2016.05.008 CSTR:

      摘要 (447) HTML (0) PDF 1.26 M (626) 评论 (0) 收藏

      摘要:苹果酸乳酸酶(简称苹乳酶)是果酒生产过程中苹果酸乳酸发酵(简称苹乳发酵)的关键酶。为了构建分泌表达苹乳酶的大肠杆菌表达系统,作者通过融合PCR将信号肽基因(487 bp)和苹乳酶基因(1 623 bp)的编码序列连接在一起,将融合片段(2110 bp)克隆到表达质粒pET28a(+)上并转化大肠杆菌,得到阳性克隆子。IPTG诱导阳性克隆子后可得到相对分子质量约为60 000左右的蛋白质,利用HPLC可在其发酵上清液中检测到240.7 mg/L的L-乳酸。这说明成功构建了分泌表达苹乳酶的大肠杆菌系统,该菌株的获得将为苹乳酶的研究和应用提供了技术平台。

    • 融合短肽促进碱性果胶酶的高效表达

      2016, 35(5):504-509. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2016.05.009 CSTR:

      摘要 (551) HTML (0) PDF 1.27 M (900) 评论 (0) 收藏

      摘要:碱性果胶酶(PGL)是一种重要的工业酶,广泛应用于食品、纺织和造纸等行业。作者将6种双亲短肽(SAP)融合至PGL N端,以期提高PGL在大肠杆菌中的分泌表达效率。得到一株高产菌株PGL-S1,胞外酶活由129.65 U/mL提高到535.47 U/mL,其他5种短肽则酶活降低。通过SDS-PAGE检测发现,PGL-S1的表达量并没有多大变化,推测可能是催化效率提高引起酶活提高。分析双亲短肽的疏水性指数发现,SAP1的疏水性不同于其他短肽,疏水性是蛋白质发生聚集的主要作用力,能够固定N、C末端,加强与底物的相互作用。推测PGL-S1融合蛋白的表面疏水性提高,促进了对底物的催化效率,具有巨大的工业应用潜力。

    • 乳酸菌发酵法制备软壳脊尾白虾技术

      2016, 35(5):510-516. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2016.05.010 CSTR:

      摘要 (395) HTML (0) PDF 1.53 M (1139) 评论 (0) 收藏

      摘要:利用乳酸菌发酵作用制备软壳脊尾白虾,研究了温度、时间、接种量等影响发酵的因素并采用响应面法优化了发酵技术参数。结果表明:乳酸菌发酵制备软壳脊尾白虾最佳条件为:时间24 h,接种量为108 cfu/mL,糖添加质量分数20%,温度25 ℃,此时的脊尾白虾虾壳穿刺峰值为 169.4 g,虾肉pH为6.5,虾风味保存良好。

    • 应用嗜热四膜虫评估苯甲酸钠的生物毒性

      2016, 35(5):517-524. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2016.05.011 CSTR:

      摘要 (439) HTML (0) PDF 1.31 M (1104) 评论 (0) 收藏

      摘要:应用2株嗜热四膜虫(Tetrahymena thermophila)Cu428.2株和B2086.2株评估了食品防腐剂苯甲酸钠(sodium benzoate,SB)的生物毒性,探讨嗜热四膜虫在食品安全监测中的应用。在SB质量分数为0%,0.01%,0.05%,0.1%,0.25%,0.5%,作用6 h,观察嗜热四膜虫的细胞形态和运动情况。结果表明:SB质量分数为0.01% 和0.05%时,两株嗜热四膜虫在Neff培养基中的活动均明显降低,细胞形态发生皱缩,细胞变小;SB质量分数为0.1%~0.5%时,两株嗜热四膜虫细胞形态明显由椭圆形变成圆形,细胞膜出现孔洞,甚至出现破裂死亡细胞,质量分数越高,细胞膜损伤越大,凋亡细胞数量越多。嗜热四膜虫培养于Neff培养基中,分别添加终质量分数为0%,0.000 1%, 0.001%,0.005%,0.01%,0.05%的 SB,测定添加SB后嗜热四膜虫的生长曲线及SB作用24 h的SOD活力,评估SB对嗜热四膜虫的种群数量和SOD活力的影响。结果表明:随着SB质量分数的增加、嗜热四膜虫的种群增长速度降低,而0.05%SB对嗜热四膜虫具有杀灭作用,但0.000 1%SB对嗜热四膜虫种群的增长有一定的促进作用。嗜热四膜虫的SOD活力基本上随着SB质量分数的增加而降低,然而低质量分数的SB可使SOD活力在一定时间内增强。

    • ARTP诱变及高效筛选高产葡萄糖氧化酶菌株

      2016, 35(5):525-530. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2016.05.012 CSTR:

      摘要 (514) HTML (0) PDF 998.15 K (1430) 评论 (0) 收藏

      摘要:以黑曲霉为出发菌株,采用常压室温等离子体(ARTP)注入技术对前培养后的出发菌株进行诱变,并结合改进后的邻联茴香胺高效平板显色圈进行初筛及摇瓶复筛。获得一株产葡萄糖氧化酶高产菌株,其产量由出发菌的45.6 U/mL提高到85.3 U/mL。通过对发酵关键条件碳酸钙和吐温-80添加量进行优化,结果显示酶活提高到125.6 U/mL,较原始菌株提高了175.4%。经6代传代培养,产葡萄糖氧化酶性能稳定。

    • 一株高产2-苯乙醇酵母菌的筛选及鉴定

      2016, 35(5):531-536. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2016.05.013 CSTR:

      摘要 (552) HTML (0) PDF 1.14 M (1198) 评论 (0) 收藏

      摘要:摘 要: 从24株不同来源的酵母菌中分离筛选出一株对2-苯乙醇耐受性强、生物转化合成2-苯乙醇能力高的优良菌株SH003,该菌株能在含有4g/L的2-苯乙醇培养基中生长,在优化的转化条件下,转化合成2-苯乙醇浓度达4.31g/L,生成速率为0.18g/L/h,L-苯丙氨酸摩尔转化率为72.4%,经菌落特征、菌体形态分析、生理生化试验,结合18S rDNA序列分析,由系统发育树表明它与酿酒酵母亲缘关系最近,确定该菌株为Saccharomyces cerevisiae。

    • 屎肠球菌和枯草芽孢杆菌混合培养条件的优化

      2016, 35(5):537-542. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2016.05.014 CSTR:

      摘要 (514) HTML (0) PDF 1023.45 K (1237) 评论 (0) 收藏

      摘要:以屎肠球菌和枯草芽孢杆菌为研究对象,以MRS培养基为基础培养基,采用单因素试验、Box-Behnken 实验设计对屎肠球菌和枯草芽孢杆菌的混合培养进行优化。结果表明:初始pH、装液量和氮源对活菌数影响显著。最优条件为:初始pH 6.5、装液量50/500 mL、氮源用量35 g/L、接种比1∶12、转速180 r/min,在此条件下活菌数达到6.99×1010 CFU/mL,比优化前提高了5倍,屎肠球菌菌株和枯草芽孢杆菌菌株的活菌数分别达到4.58×1010 CFU/mL和2.41×1010 CFU/mL。

    • 不同干燥工艺对南美白对虾仁品质的影响

      2016, 35(5):543-548. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2016.05.015 CSTR:

      摘要 (1024) HTML (0) PDF 1.19 M (1416) 评论 (0) 收藏

      摘要:以南美白对虾仁为实验原料,研究了热风干燥、微波干燥、热风联合微波喷动干燥和真空冷冻干燥对南美白对虾的影响,并且以干燥速率、复水率、色泽变化、质构以及脂肪氧化等指标进行比较。研究结果表明:真空冷冻干燥得到产品的品质最好,但是干燥时间是热风干燥的2.25倍,是微波干燥和热风联合微波干燥的9倍和10.3倍;热风联合干燥能够克服单一微波干燥的不均匀性,且干燥后样品的品质最接近于真空冷冻干燥,因此热风联合微波喷动干燥是一种具有发展前景的干燥方法。

    • 樟芝发酵产物中安卓奎诺尔的提取纯化

      2016, 35(5):549-555. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2016.05.016 CSTR:

      摘要 (479) HTML (0) PDF 1.55 M (1212) 评论 (0) 收藏

      摘要:对樟芝发酵产物中的生理活性物质安卓奎诺尔的提取纯化工艺技术进行了研究。结果表明,安卓奎诺尔的最佳的提取条件为:提取溶剂为95%乙醇,料液比1∶25(g/mL),提取温度为35 ℃,提取时间为85 min。提取液再经过二次柱层析进一步纯化。第一次硅胶柱层析最佳条件为:上样量1∶40(w样品∶w硅胶),径高比1∶30,洗脱流速2.0 BV/h,产物中安卓奎诺尔的纯度为70.2%;第二次硅胶柱层析最佳条件为:洗脱剂v苯∶v丙酮=7∶3,上样量w样品∶w硅胶=1∶30,径高比1∶10,洗脱流速1.0 BV/h,最终产品中安卓奎诺尔的纯度达到91.0%。

    • 沙门氏菌比对试验的检验分析

      2016, 35(5):556-559. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2016.05.017 CSTR:

      摘要 (431) HTML (0) PDF 539.60 K (2447) 评论 (0) 收藏

      摘要:选择鼠伤寒沙门氏菌和甲型副伤寒沙门氏菌分别与检验中常见的5种其它肠杆菌属细菌组合成染菌虾仁模拟样品10组,按照现行的检验标准GB 4789.4-2010进行沙门氏菌检验[1]。10组样品均能检出沙门氏菌和干扰菌,检验结果准确。在检验过程中发现BS平板需要经过培养48 h才能观察到明显的菌落特征;增菌液培养时间越长,沙门氏菌的生长越好;甲型副伤寒沙门氏菌有微弱产H2S现象;粘质沙雷氏菌对鼠伤寒沙门氏菌的硫化氢反应有抑制作用;奇异变形杆菌和柠檬酸杆菌与沙门氏菌属A-F多价O诊断血清发生交叉凝集反应现象。培养过程中发现的检测技术问题,在水产品、动物及动物产品的沙门氏菌等肠杆菌属的检验中,都有很好的借鉴意义。

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