2017, 36(12):1233-1240. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.12.001 CSTR:
摘要:藻蓝蛋白是一种存在于蓝藻、螺旋藻细胞中的色素蛋白复合体,除了能够捕获光能为藻类细胞提供能量外,藻蓝蛋白还具有抗炎性、抗肿瘤、抗氧化等多种生理功能,全面了解和掌握藻蓝蛋白的生理调控功能以及作用机制对藻蓝蛋白的开发与利用有着重要的指导意义。作者以藻蓝蛋白的研究现状出发,分别从抗肿瘤、抗炎、抗氧化以及免疫调节活性几个方面对藻蓝蛋白的生理功能和作用机制进行了阐述,对藻蓝蛋白提取过程中关键瓶颈——藻毒素的去除方法进行了总结和分析,并进一步提出了研究藻蓝蛋白调控机制的新筛选方法。作者为深入研究藻蓝蛋白的调控机理以及进一步开发安全性药物提供参考。
2017, 36(12):1241-1245. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.12.002 CSTR:
摘要:以前期构建的产Bacilluscirculans β-半乳糖苷酶重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET-20b-lac为菌种,进行摇瓶发酵诱导培养,培养24 h胞外上清酶活达15 U/mL。利用制备的β-半乳糖苷酶粗酶液进行酶转化实验。优化了酶转化条件,考查了初始pH、反应温度、乳糖质量浓度、加酶量和反应时间等因素对低聚半乳糖产率的影响。确定最优转化条件为:初始pH 6.5、反应温度55 ℃,起始乳糖质量浓度为700 g/L,加酶量为8 U/mL。在此条件下反应16 h,低聚半乳糖转化率可达57%。
韦康 , 王丽鸳 , 王新超 , 陈建兴 , 胡惜丽 , 杨广谊 , 成浩
2017, 36(12):1246-1250. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.12.003 CSTR:
摘要:利用透射电镜技术研究了黄化品种“中黄2号”与正常品种“龙井43”第2、6叶的亚细胞结构差异。结果发现中黄2号与龙井43在细胞核、胞质、线粒体、高尔基体等亚细胞结构和分布规律方面基本一致,而叶绿体结构则有较大差异。中黄2号第2叶叶绿体明显偏小,且基粒片层堆叠少于龙井43。其第6叶片层堆叠多于第二叶,但仍少于龙井43。叶绿体内片层堆叠情况与其含量测定结果一致。同时,遮荫处理后中黄2号叶色变绿,叶绿体片层堆叠也增多。研究发现,中黄2号的黄化可能与其叶绿体基粒片层合成受阻有关,该结果为深入解析中黄2号黄化的机理打下基础。
2017, 36(12):1251-1257. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.12.004 CSTR:
摘要:对来源于土壤宏基因组的未培养微生物筛选的木聚糖酶基因X1-19进行了毕赤酵母异源重组并对其产酶条件进行了优化。最佳的甲醇添加终体积分数为1%,接种密度为8×108个/mL,YNB的质量分数为1.2%,240 r/min,初始pH为5时,转化子产酶能力最高为(79.0±2.2) U/mL。研究为未培养微生物木聚糖酶基因的异源表达工业生产提供理论依据,具有较好的工业应用前景。
晏子俊 , 李万玉 , 胡雪原 , 何丹 , 谢江川 , 张景勍
2017, 36(12):1258-1263. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.12.005 CSTR:
摘要:制备自组装天冬酰胺酶(Asparaginase,AAS)透明质酸-聚乙二醇(Hyaluronic acid-graft-poly(ethylene glycol),HA-g-PEG)/羟丙基-β-环糊精(Hydroxypropyl-beta -cyclodextrin,HPCD) 纳米微球(self-assembly HA-g-PEG / HPCD hollow nanospheres loaded with AAS,AHHPs),并对AHHPs的体外活性及稳定性进行初步研究。制备并测定AHHPs的透射电镜、粒径、Zeta电位和包封率。再分别从最适温度、最适pH、热稳定性、贮存稳定性、酸碱稳定性、抗胰蛋白酶水解能力和血浆稳定性初步考察AHHPs的体外活性和稳定性。测得AHHPs的平均粒径为(367.43±2.72)nm,Zeta电位为(-15.70±1.25) mV,平均包封率为(66.03±3.81)%。AHHPs的最适温度为50 ℃,最适pH值为7.0;游离AAS的最适温度为60 ℃,最适pH值为7.5。体外稳定性的结果显示,同样条件下,AHHPs的体外稳定性明显比游离AAS的好。因此AHHPs能有效提高AAS的体外活性和体外稳定性。
2017, 36(12):1264-1268. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.12.006 CSTR:
摘要:为了开发一种能水解核苷的嘌呤核苷磷酸化酶(Purine Nucleoside Phosphorylase,PNPase),将其添加到糖化醪液中,增加麦汁中的游离嘌呤碱基质量浓度,在后续发酵阶段游离嘌呤碱基被酵母利用,提高了嘌呤物质的利用率,最终啤酒中的嘌呤质量浓度减少。将PNPase的编码基因deoD导入表达载体pET-28a(+)中,采用化学转化法将载体转入到大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,研究重组PNPase的活性,并将其应用到糖化工艺中。获得的重组PNPase活性为184.46 U/mL,添加到糖化醪液中后,麦汁中游离嘌呤碱基质量浓度升高,酵母可吸收的游离嘌呤质量浓度增多,啤酒发酵液嘌呤质量浓度显著降低,为后续研究使啤酒嘌呤含量的降低奠定了一定的基础。
王革新 , 徐捷 , 何志勇 , 曾茂茂 , 秦昉 , 陈洁
2017, 36(12):1269-1275. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.12.007 CSTR:
摘要:大豆分离蛋白乳状液凝胶在豆制品以及肉制品中有广泛的应用,因此如何提升乳状液凝胶的强度和持水性受到广泛关注。作者利用流变、质构和显微结构分析,详细研究了促凝剂、乳状液稳定性、小分子表面活性剂对于大豆分离蛋白乳状液凝胶强度和持水性的影响。结果表明,乳状液稳定性好的其凝胶强度与持水性也相对要好。对于促凝剂,硫酸钙与葡萄糖酸内脂混合凝胶要优于两者单独促凝的效果。当吐温20添加量小于体积分数0.4%时,其能够减弱凝胶强度,体积分数高于0.4%时,能够增强凝胶强度,但是持水性都是呈下降趋势。大豆卵磷脂对于凝胶强度没有明显的改善,但是对于持水性有明显的提高作用。
李秀梅 , 梁智选 , 李颖 , 郭恋 , 王健春 , 赵静 , 王红军
2017, 36(12):1276-1282. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.12.008 CSTR:
摘要:将环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)与横向流动试纸条技术(Lateral flow dipstick,LFD)联合应用,建立了一种快速、便捷的布鲁氏杆菌检测方法。针对布鲁氏杆菌OMP25基因设计4条特异性引物和1条异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的探针。生物素标记LAMP扩增产物能够特异性地与FITC标记的探针杂交,杂交产物经LFD检测。优化后的扩增温度和时间为63 ℃反应50 min,加上样品的前处理,完成检测仅需80 min。LAMP-LFD方法可特异性地检出布鲁氏杆菌,其最低检测限为5.4×100 CFU/mL,是利用外引物建立的PCR方法的100倍。试验结果表明,本研究建立的LAMP-LFD方法能够快速、特异地检测布鲁氏杆菌;简单经济,不需要其他辅助仪器,结果即可直观判断;适合基层实验室、应急检测或现场监测等使用,具有较高的推广价值。
胡爱华 , 敖晓琳 , 蒲彪 , 陈安均 , 陈岑 , 张国丽
2017, 36(12):1283-1289. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.12.009 CSTR:
摘要:比较不同发酵度茶叶的理化及香气成分。测定绿茶、乌龙茶、红茶和藏茶的常规成分、活性成分;采用顶空固相微萃取(headspace solidphase micro-extraction,HS-SPME)结合气相色谱-质谱联用(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)分析香气成分。4种茶样水分、灰分质量分数差异较小,绿茶水浸出物和蛋白质质量分数高于乌龙茶、红茶和藏茶,而粗纤维质量分数最低;红茶和藏茶中茶多酚和儿茶素的质量分数明显低于绿茶和乌龙茶,咖啡碱的质量分数稍高于绿茶和乌龙茶;绿茶中主要香气是醇类和烯烃类,红茶主要香气成分是酮类、醇类、酯类、醛类,藏茶中主要香气成分是酮类和酯类,乌龙茶中各香气成分检出量不多,分布相对平衡。
王海宏 , 陈志军 , 颜伟强 , 孔秋莲 , 岳玲 , 戚文元 , 孙御风
2017, 36(12):1290-1297. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.12.010 CSTR:
摘要:为了研究电子束辐照处理对速冻芦笋检疫杀菌的工艺及效果,以速冻芦笋为试材,检测电子束辐照下金黄色葡萄球菌和出血性大肠杆菌的D10值,初始污染菌以及感官和营养品质变化。结果表明,接种菌悬液的速冻芦笋中,金黄色葡萄球菌、出血性大肠杆菌的D10值分别为0.35 kGy和0.25 kGy。经4.0 kGy辐照处理后,产品中菌落、霉菌、大肠菌群均未检出,感官指标未发生明显变化,营养品质仅维生素C含量下降稍快。产品的电子束穿透深度剂量分布试验表明,双面辐照工艺,辐照深度为14.2 cm时,不均匀度1.15,可以满足生产要求。建议采用4.0 kGy以下剂量辐照速冻芦笋产品,可以有效控制食源性致病菌,保障产品食用安全性。
2017, 36(12):1298-1303. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.12.011 CSTR:
摘要:为了使果蔬尽早进入气调状态,达到提高贮藏品质的目的,作者对影响气调库快速降氧时间的因素进行了研究。以西安某苹果气调库为研究对象,采用 k-ε紊流模型建立了气调库内气体流动、传热与传质的三维数学求解模型,并通过编写UDF 程序获得苹果呼吸强度和冷风机送风口O2、CO2质量分数随库内气体组分体积分数变化实时数据。通过改变制氮机工作参数和果蔬品种对该气调库的充氮降氧过程进行数值模拟,获得库内O2体积分数随时间变化的规律,并与实验数据呈现较好的一致性。结果表明:不同的氮气纯度对应着相应的最快降氧区间。作者研究对象选择体积分数为96%的氮气所需降氧时间最短,呼吸强度差别较大的果蔬降氧时间有明显差异。
李明生 , 靳冬武 , 张健 , 冯玉萍 , 郑荣 , 张磊 , 李倬 , 马忠仁
2017, 36(12):1304-1310. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.12.012 CSTR:
摘要:基于猪胰脏提取胰蛋白酶,以酶活力为衡量指标,在单因素试验的基础上通过正交试验探讨了胰蛋白酶原的激活条件,并通过离子交换层析纯化胰蛋白酶,最后探讨胰蛋白酶对BHK-21和Vero两种贴壁依赖性细胞的消化效果。结果表明,胰蛋白酶原最佳的激活条件为:激活剂浓度0.2 mol/L,pH 8.5,16 ℃下激活1.5 h,酶活力达到2 953.68 U/mg。通过DEAE sepharose FF纯化后其酶活力达到3 980.42 U/mg,纯化倍数达到2.26;细胞消化结果表明,用其消化BHK-21细胞和Vero细胞并连续10代,平均消化时间和细胞增殖浓度与Hyclone和Gibco产品没有明显的差异(p>0.05),每代细胞形态良好,生长正常。该工艺简单,激活耗时短,易于产业化,为胰蛋白酶的国产化和进一步研究奠定理论依据。
2017, 36(12):1311-1315. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.12.013 CSTR:
摘要:为建立茯苓菌丝体蛋白双向电泳体系并鉴定部分蛋白质,作者采用双向电泳技术对摇瓶培养的茯苓菌丝体蛋白进行分离,并利用MALDI-TOF/TOF对部分蛋白质进行鉴定。结果表明,2-DE图谱获得蛋白质点数较多、清晰、蛋白质点分离较完全且图谱背景清晰,挑取蛋白质点进行了鉴定。本研究确定的双向电泳条件分离蛋白质效果及重复性好,为下一步利用该方法寻找具有重要功能的新茯苓菌丝体蛋白创造了条件。
2017, 36(12):1316-1323. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.12.014 CSTR:
摘要:利用酿酒酵母静息细胞转化合成2-苯乙醇,确定了静息细胞转化菌龄、转化液缓冲液体系和辅酶NADH再生辅助底物。在单因子试验基础上,用Plackett-Burm设计从影响转化6个因素中筛选出影响细胞转化的显著因素:辅助底物乙醇质量浓度、转化液pH和转化温度,以Box-Benhnken试验设计结合响应面法分析确定显著因子的最优水平。结果表明,最佳转化条件为乙醇质量浓度16.5 g/L、pH 5.1、转化温度26 ℃,2-苯乙醇产量为3.49 g/L(转化率58.8%),比优化前提高了49.14%,静息细胞重复使用8次,2-苯乙醇产量无明显下降。转化液中加入10%的大孔吸附树脂对产物进行原位产物吸附,转化40 h,2-苯乙醇总质量浓度达9.34 g/L,L-苯丙氨酸转化率为83.9%,产量比未加入大孔树脂提高了171.5%。
2017, 36(12):1324-1329. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.12.015 CSTR:
摘要:研究谷氨酸改性磁性壳聚糖微球对于牛血清白蛋白的吸附。采用反相悬浮法制备谷氨酸改性磁性壳聚糖微球(GA-CMNs),利用红外光谱仪检测壳聚糖连接谷氨酸效果、扫描电子显微镜(SEM)观察微球形貌、激光粒度仪检测微球粒径分布;考察不同pH值、NaCl质量分数、BSA质量浓度、吸附时间对谷氨酸改性磁性壳聚糖微球BSA吸附效果的影响,并对吸附行为进行吸附动力学和吸附热力学分析。结果表明:最佳吸附溶液pH值为5,BSA质量浓度、吸附时间与BSA吸附量呈正相关,而NaCl质量分数则相反;谷氨酸改性磁性壳聚糖微球对BSA吸附平衡过程符合动力学准二级方程模型和Langmuir吸附等温线模型,在BSA初始质量浓度为1 mg/mL时有最大平衡吸附值,为83.5 mg/g;经过5次3% NaCl溶液洗脱-吸附操作循环后,洗脱率仍高于90%。谷氨酸改性磁性壳聚糖微球对牛血清蛋白的吸附性能良好。
2017, 36(12):1330-1335. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.12.016 CSTR:
摘要:乙醇-沼气双发酵耦联工艺可有效解决玉米乙醇生产过程存在的能耗大、废水处理成本高的问题。作者研究了耦联工艺对玉米乙醇生产过程的主要副产物酒糟蛋白饲料的影响。结果表明,与传统的干磨工艺比较,耦联工艺所得的酒糟蛋白饲料含有较高质量分数的蛋白质和氨基酸,较低质量分数的盐,因此拥有更高的营养价值。利用电子鼻和气质联用对酒糟蛋白饲料气味进行分析,发现循环批次所得酒糟蛋白饲料与第一批在气味上表现出一定的差异,但是不会影响家畜的食用。
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