• 2017年第36卷第5期文章目次
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    • 果蔬生物保鲜新技术及其研究进展

      2017, 36(5):449-455. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.05.001

      摘要 (1309) HTML (0) PDF 953.15 K (1890) 评论 (0) 收藏

      摘要:在果蔬保鲜中应用生物技术,有污染小、成本低等优点,相比传统的保鲜技术有较大优势。本文主要讨论了几种常见的生物保鲜技术:一是拮抗菌保鲜技术,介绍了其保鲜作用原理以及在果蔬保鲜中的应用;二是基因工程保鲜技术,主要从减少乙烯合成、控制细胞壁降解酶的活性两个方面进行了阐述;三是酶工程保鲜技术,主要介绍了酶制剂在果蔬保鲜中的应用。

    • 人血清白蛋白-白介素-2融合蛋白在CHO细胞中的表达

      2017, 36(5):456-460. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.05.002

      摘要 (680) HTML (0) PDF 800.23 K (985) 评论 (0) 收藏

      摘要:白细胞介素-2在人体免疫应答中具有重要作用,常用于治疗肿瘤、肝炎和免疫缺陷性疾病等多种疾病,但因其体内半衰期短而限制了其临床应用。文中构建了含有融合蛋白基因HSA-IL-2的pMH3质粒,并通过电转染的方法转入中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO细胞)中,利用pMH3质粒所携带的neo基因进行筛选,经96孔板培养并筛选得到稳定表达目的蛋白质的重组细胞,融合蛋白HSA-IL-2表达量达到2.26 mg/L。利用反转录PCR和Western blot对重组细胞鉴定后发现,融合蛋白编码基因整合入重组CHO细胞基因组中,而且融合蛋白同时具有HSA和IL-2双重免疫原性。利用对IL-2具有依赖性的CTLL-2细胞进行活性分析后发现,筛选得到的表达细胞分泌得到的融合蛋白具有较高的生物活性,表明成功构建具有表达IL-2生物活性能力的CHO细胞。

    • 天门冬酰胺酶纳米囊的药动学及生物等效性研究

      2017, 36(5):461-465. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.05.003

      摘要 (928) HTML (0) PDF 3.53 M (1391) 评论 (0) 收藏

      摘要:作者研究了载天门冬酰胺酶(Asparaginase,AN)自组装透明质酸-聚乙二醇(Hyaluronic acid-graft-poly(ethylene glycol),HA-g-PEG)/γ-环糊精(γ-cyclodextrin,γ-CD)纳米囊(HA-g-PEG/γ-CD nanocapsules loaded with AN,AHRPs)在雄性SD大鼠体内的药代动力学和生物等效性。考察了AHRPs的透射电镜、粒径、Zeta电位、包封率,并分别测定大鼠静脉给予AHRPs和游离AN后,不同时间点大鼠血浆样品中AN的活性。采用DAS 2.1.1软件计算药动学参数,对AHRPs和游离AN进行生物等效性评价。经计算,AHRPs的平均粒径为(410.30±3.20) nm,Zeta电位为(-31.40±1.65) mV,平均包封率为(42.80±4.37)%。AHRPs和游离AN的主要药动学参数AUC(0~48 h)分别为(104.01±1.68) U/(mL·h)和(46.38±1.98) U/(mL·h),AUC(0~∞)分别为(131.03±19.67) U/(mL·h)和(51.44±3.01) U/(mL·h),t1/2分别为(4.31±1.53) h和(1.86±0.38) h。与游离AN比较,AHRPs的AUC(0~48 h)、AUC(0~∞)和t1/2分别提高了2.24、2.55和2.32倍。AUC(0~48 h)、AUC(0~∞)和Cmax的90%可置信区间分别为77.1%~78.7%、76.7%~78.3%、98.9%~100.5%。AHRPs延长了AN在大鼠体内的生物半衰期,提高了AN在大鼠体内的生物利用度,且AHRPs与游离AN不具有生物等效性。

    • 基于微波加热的馒头介电特性的分析与研究

      2017, 36(5):466-472. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.05.004

      摘要 (611) HTML (0) PDF 1019.41 K (1211) 评论 (0) 收藏

      摘要:基于一种同轴探头网络分析仪技术和混合方程的途径研究微波加热馒头的介电特性。测量馒头在不同密度下的介电特性值,运用回归分析方法得出介电特性与频率的关系,通过比较馒头介电特性混合方程计算值和测量值,得到Bottcher方程适用于计算馒头的介电常数,Landau and Lifshitz,Looyenga方程用于计算馒头的损耗因子。研究频率范围915~2 450 MHz、含水率范围40.12%~48.50%(w.b.)和温度范围25~100 ℃下馒头介电特性的变化规律。研究表明:馒头的介电常数随着频率的增加而减小,损耗因子随着频率的增加呈现出先减小后很缓慢增大的趋势;介电常数和损耗因子均随含水率和温度的增加而增加。馒头微波加热的穿透深度随着各影响因素的增加而减小,且在25~100 ℃温度范围内,915 MHz和2 450 MHz微波加热馒头最大厚度分别不超过12.82 cm和10.62 cm。

    • 多酶偶联催化制备手性化合物(S)-环氧苯乙烷

      2017, 36(5):473-478. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.05.005

      摘要 (606) HTML (0) PDF 1.35 M (1044) 评论 (0) 收藏

      摘要:在水/有机两相中将羰基还原酶SyS1、葡萄糖1-脱氢酶SyGDH和卤代醇脱卤酶C SyHheC偶联催化α-溴代苯乙酮以高效制备(S)-环氧苯乙烷(SO)。第1步反应催化α-溴代苯乙酮不对称还原为(S)-2-溴-1-苯基乙醇((S)-BPE) 及NADPH的原位再生,其优化的反应条件:100 mmol/L磷酸钾缓冲液(pH 8.0)/正己烷(V∶V=4∶6)、40 mmol/L α-溴代苯乙酮、80 mmol/LD-葡萄糖、0.2 mmol/L NADP+和70 mg/mL E. coli/Sygdh-Sys1湿菌体(共表达SyGDH和SyS1),终体积1.0 mL,35 ℃反应8 h。第2步反应催化(S)-BPE脱卤闭环为(S)-SO,其反应条件:在上述反应体系中加入磷酸钾缓冲液(pH 8.0) 和0.3 U SyHheC,终体积2.0 mL,35 ℃反应30 min。通过连续2步酶催化反应,终产物(S)-SO的摩尔产率为99%、对映体过量值>99%。

    • 甜菜树贝壳杉烯合酶基因的克隆与原核表达

      2017, 36(5):479-485. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.05.006

      摘要 (641) HTML (0) PDF 1.40 M (1027) 评论 (0) 收藏

      摘要:本文作者研究了赤霉素合成途径中的关键酶-贝壳杉烯合酶,对其功能的研究可以为以后优化品种提供基因层面的基础。首先通过RACE-PCR技术,从甜菜树叶片中克隆得到贝壳杉烯合酶基因(Ent-kaurene synthase gene,YlKS)的全长cDNA,共2 512 bp(GenBank登录号为KP872698),其ORF长度为2 232 bp,共编码743个氨基酸,预测蛋白质相对分子质量大小为84 987,蛋白质等电点为5.264,表明该蛋白质呈酸性。将该基因构建到表达载体pET32a中,得到重组质粒pET-32a-YlKS。通过将pGG/An2、pIRS和重组质粒pET-32a-YlKS 3个质粒共转入菌株BL21(DE3)中,得到重组菌株,并进行发酵。通过SDS-PAGE分析发现,重组蛋白成功得到了表达。最后通过对发酵产物进行萃取,并使用GC-MS进行检测,确定了该基因所编码的酶确实是贝壳杉烯合酶。

    • 餐厨垃圾与剩余污泥混合消化产甲烷性能及动力学分析研究

      2017, 36(5):486-493. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.05.007

      摘要 (993) HTML (0) PDF 1.30 M (1807) 评论 (0) 收藏

      摘要:将餐厨垃圾与剩余污泥作为底物,设置VS质量比分别为1∶0,0∶1和1∶1 3组对照组,通过产甲烷性能和动力学的分析来研究单独厌氧消化与混合消化。结果表明在整个运行期间,除了可以提高产甲烷的效率,混合消化组还能缩短餐厨垃圾单独厌氧消化的产甲烷时间,其甲烷产量为233.394 mL/gVS,比餐厨垃圾与剩余污泥单独厌氧消化计算值198.939 mL/gVS提高17.4%,利用一级动力学模拟3组产甲烷量,相关性系数R2均大于0.989。餐厨垃圾组、剩余污泥组和混合消化组的G∞分别为276.5、113.955 mL/gVS和248.81 mL/gVS,与实际测量值285.24、112.238 mL/gVS和233.94 mL/gVS相近。同时对反应过程中的pH、VFAs、SCOD以及脱氢酶进行了对比分析,相比于餐厨垃圾的单独厌氧消化,添加一定的剩余污泥可以平衡营养物质,降低反应体系的酸化,使混合后的底物具有较大的缓冲能力,提高系统稳定性;而对剩余污泥单独厌氧消化而言,添加一定的餐厨垃圾可以增加有机物含量,提高了产甲烷处理效果。混合消化组的脱氢酶酶活在整个反应过程都大于餐厨垃圾单独消化,最大值为657.2 TFμg/(mL·h)。

    • 钙诱导花生蛋白纳米颗粒的制备及其工艺优化

      2017, 36(5):494-498. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.05.008

      摘要 (535) HTML (0) PDF 773.83 K (1435) 评论 (0) 收藏

      摘要:花生蛋白作为大宗优质的植物蛋白质,资源丰富,营养价值高,具有良好的开发潜能。以花生分离蛋白为基质材料制备花生分离蛋白纳米颗粒,并优化其最佳制备工艺。通过纳米激光粒度仪及透射电子显微镜(TEM)对纳米颗粒的粒径及形态进行表征。结果表明,制备的纳米颗粒球形圆整,分散性好,粒径分布较窄,平均粒径为(94.66±0.53) nm。以花生蛋白为原料制备纳米颗粒,不仅可拓宽花生蛋白应用领域,也为开发蛋白纳米颗粒新剂型提供一定的研究基础。

    • 自然水体生物膜胞外聚合物的提取及优化

      2017, 36(5):499-506. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.05.009

      摘要 (543) HTML (0) PDF 1.19 M (1685) 评论 (0) 收藏

      摘要:以自然水体生物膜为研究对象,蛋白质和多糖的提取量作为生物膜胞外聚合物(EPS)提取总量的衡量指标,核酸含量用于表征细胞破裂程度,本文作者以高速离心法为对照,分别研究了加热法、EDTA法、NaOH+NaCl法和超声+CER法对自然水体生物膜胞外聚合物的提取效果,从而确定自然水体生物膜最适提取方法并对实验条件进行优化。研究结果表明,NaOH+NaCl法因提取胞外聚合物总量高,核酸含量较少为最适提取方法。在NaOH浓度为2 mol/L,NaCl质量分数为0.85%,萃取2.5 h,分离转速为7 000 g条件下,EPS提取量为157.57 mg/L。

    • 生鲜食品冷链控温包装设计方法研究

      2017, 36(5):507-511. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.05.010

      摘要 (852) HTML (0) PDF 925.18 K (1021) 评论 (0) 收藏

      摘要:控温包装能有效保护生鲜食品在物流过程中不受外界温度变化的影响,防止生鲜食品腐败变质。本文作者基于控温包装控温时间预测模型,建立了控温包装设计模型,得到了控温包装可靠性边界,并提出一套用于冷链物流的控温包装设计方法。同时,以小件类产品为例,设计了一套控温包装,并进行试验验证。结果表明,设计的控温包装能够保持产品物流过程中处于临界温度以下,该控温包装设计方法能够快速有效的设计合理的包装方案,该研究成果为生鲜食品在物流过程中的保鲜提供了技术方法。

    • 循环超声提取玛咖生物碱动力学及热力学研究

      2017, 36(5):512-518. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.05.011

      摘要 (587) HTML (0) PDF 1021.94 K (1252) 评论 (0) 收藏

      摘要:研究不同温度和超声密度下循环超声提取玛咖生物碱的动力学及热力学。分别采用双指数模型和范特霍夫方程用于提取动力学过程拟合和热力学参数计算。结果表明双指数模型能较好的拟合玛咖生物碱提取过程,生物碱得率和速率常数随着温度或超声密度的增加而增加,洗涤和扩散阶段的活化能分别为16.41 kJ/mol和17.52 kJ/mol。循化超声提取过程是吸热、不可逆和自发的。与传统浸提相比,循环超声提取在20 ℃和50 ℃时,生物碱得率均显著高于传统浸提(p<0.01)。因此循环超声提取是一种高效的提取技术,可用于玛咖生物碱提取。

    • 超高压对解脂耶氏酵母脂肪酶酶活的影响

      2017, 36(5):519-523. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.05.012

      摘要 (588) HTML (0) PDF 694.00 K (1816) 评论 (0) 收藏

      摘要:研究了超高压体系中,压力、温度、pH和保压时间对解脂耶氏酵母脂肪酶活性的影响。结果表明:在超高压作用下,解脂耶氏酵母脂肪酶的活性有所提高;经正交试验优化得到在压力450 MPa、温度45 ℃、pH 7.5、保压时间10 min条件下,脂肪酶活性最高,为同等条件下常压处理的脂肪酶活性的220%。经高压处理后,脂肪酶的最适pH 较常压条件下向碱性方向移动0.5。

    • 蘘荷总黄酮的提取工艺及其体外抑菌活性研究

      2017, 36(5):524-530. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.05.013

      摘要 (525) HTML (0) PDF 2.55 M (1540) 评论 (0) 收藏

      摘要:利用响应面法确定蘘荷总黄酮的最佳提取工艺,并探讨其体外抑菌活性。在单因素实验的基础上,进行4因素3水平的Box-Behnken中心组合实验设计,利用响应面分析优化工艺条件;对此工艺下的提取液进行浓缩,通过牛津杯法和二倍稀释法探讨其抑菌活性。在优化工艺条件乙醇体积分数94.75%、处理温度100 ℃、液料比85∶1 (mL∶g)、处理时间70 min时,蘘荷总黄酮得率为39.87%,与预测值40.79%的相对误差仅2.26%;蘘荷总黄酮对大肠杆菌、酿酒酵母、黑曲霉没有抑制作用,对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌有抑制作用,其MIC分别为3.245 9、1.622 9 mg/mL,MBC分别为12.983 5、6.491 8 mg/mL。蘘荷总黄酮可作为一种新型抗菌药物开发,其提取工艺可用响应面法进行回归分析和参数优化。

    • 一种番茄复合酶解提取物的制备及其在卷烟加香中的应用

      2017, 36(5):531-536. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.05.014

      摘要 (551) HTML (0) PDF 859.51 K (1738) 评论 (0) 收藏

      摘要:为进一步挖掘番茄提取物在卷烟中的应用,本文研究了复合酶水解—美拉德反应处理复配后的番茄提取物的化学成分及其应用效果。结果表明,经果胶酶-糖化酶-纤维素酶复合酶处理,再经美拉德反应后的番茄提取物,经GC-MS分析,可获得13种挥发性成分;该流程获得的番茄提取物主要是低相对分子质量的醛类、酮类、酯类和醇类化合物,分子结构相对简单,溶解性较好,用于卷烟加香加料时,更易于卷烟的吸收;产物经蒸馏获得的挥发性头香组分和沉淀萃取的潜香组分,通过不同比例复配应用于卷烟后,具有不同感官效果;添加实验表明,番茄复合酶解提取物应用于烟丝后,能够柔和烟气、丰富烟香、增加清甜韵感、降低刺激感,有利于卷烟抽吸品质的提升。

    • 凤丹籽蛋白氨基酸分析及营养评价

      2017, 36(5):537-541. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.05.015

      摘要 (464) HTML (0) PDF 731.87 K (1596) 评论 (0) 收藏

      摘要:以凤丹籽为原料,采用氨基酸自动分析仪分析其氨基酸组成,并对比参照全鸡蛋蛋白、大豆分离蛋白和FAO/WHO推荐模式的氨基酸组分,对凤丹籽蛋白的氨基酸成分进行营养评价。结果表明:凤丹籽蛋白共检测出16种氨基酸(除色氨酸外),其中必需氨基酸为总氨基酸质量分数的38.9%,必需氨基酸指数EAAI值为72.3、生物价BV为67.1。采用模糊识别法计算出的与全鸡蛋蛋白的贴近度为0.90,氨基酸比值系数分SRC为81.6,以上均优于大豆分离蛋白,化学评分CS有多项优于或接近大豆分离蛋白。以上分析结果说明凤丹籽氨基酸组成的平衡性指标很好,是一种新型的优质氨基酸来源,有着良好的应用前景。

    • 基于甲流病毒突变度的疫情早期预警模型

      2017, 36(5):542-546. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.05.016

      摘要 (635) HTML (0) PDF 633.72 K (1389) 评论 (0) 收藏

      摘要:通过比较每年与其上一年报道的甲流病毒HA蛋白质序列之间的差异,构建了突变度的算法。对所选的1916~2014年HA蛋白质序列利用此算法计算出每年的突变度,观察到这4次大型流感爆发年份的突变度值都比相邻的年份要高,并且突变度值越大,流感的范围和影响就越大。结果表明这种方法建立的比较合理,效果不错。这对流感爆发的研究、预警和防御有着重要的意义。

    • 水/有机溶剂双相体系中色氨酸合成酶酶法合成2-甲基-L-色氨酸

      2017, 36(5):547-552. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.05.017

      摘要 (515) HTML (0) PDF 925.50 K (2048) 评论 (0) 收藏

      摘要:本文作者研究了水/有机溶剂双相体系中利用色氨酸合成酶催化L-丝氨酸和2-甲基吲哚合成2-甲基-L-色氨酸,考察了有机溶剂、有机溶剂体积分数、pH、反应温度、表面活性剂、金属离子和底物浓度对色氨酸合成酶催化合成2-甲基-L-色氨酸的影响。有机溶剂包括二甲苯、甲苯、乙酸乙酯、乙酸丁酯和辛醇,表面活性剂包括吐温80、聚乙二醇辛基苯基醚(OP)、CTAB和Trion X-100,金属离子包括Mg2+、Ca2+、Cu2+、Co2+和Zn2+。结果表明,酶法最佳转化条件为:有机相溶剂为甲苯,甲苯体积分数为2%,反应温度为40 ℃,水相pH为8,底物L-丝氨酸浓度为150 mmol/L,表面活性剂Trion X-100质量分数为2%,金属离子Ca2+浓度为0.1 mmol/L,色氨酸合成酶酶促反应5 h,2-甲基-L-色氨酸的质量浓度为21.17 g/L。重组大肠杆菌DM206可作为2-甲基-L-色氨酸生产菌,具有较好的2-甲基-L-色氨酸生产潜力。

    • 人IL-29定点突变体抗肿瘤细胞增殖活性分析

      2017, 36(5):553-559. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2017.05.018

      摘要 (533) HTML (0) PDF 1.32 M (1376) 评论 (0) 收藏

      摘要:为分析人白细胞介素-29(hIL-29) 变异体抗肿瘤细胞增殖活性,采用大引物PCR方法对人hIL-29基因第104位碱基进行点突变,使hIL-29肽链第35位Arg定点改造为Lys。得到的hIL-29变异体基因经重组后转化毕赤酵母GS115和诱导表达,经纯化获得重组蛋白rhIL-29mut35。SDS-PAGE分析显示rhIL-29mut35的相对分子质量约23×103,Western Blotting鉴定显示其与羊抗人IL-29多克隆抗体发生特异性结合反应。用CCK-8试剂检测rhIL-29mut35对肿瘤细胞增殖的影响,rhIL-29mut35在不同质量浓度时对胃癌细胞SGC7901、肝癌细胞BEL7402、肺腺癌细胞A549和结肠癌细胞HCT8的增殖均有抑制作用,高剂量组(1 000 ng/mL)rhIL-29mut35对胃癌细胞SGC7901、肝癌细胞BEL7402、肺腺癌细胞A549和结肠癌细胞HCT8增值的抑制率分别为(34.20±1.50)%、(27.30±0.31)%、(30.20±0.68)%、(29.13±1.40)%,与阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。而且高剂量组的抗增殖效应高于野生型rhIL-29的(P<0.01),这为进一步研制开发IL-29的抗肿瘤药物奠定基础。

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