• 2022年第41卷第2期文章目次
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    • LAMP在阪崎克罗诺杆菌检测中的研究进展

      2022, 41(2):1-7. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2022.02.001

      摘要 (832) HTML (0) PDF 1.08 M (1147) 评论 (0) 收藏

      摘要:阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii)是一类食源性致病菌,可引起新生儿脑膜炎、败血症等疾病。环介导等温扩增(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP)技术是一类新型的恒温核酸扩增技术,具有灵敏度高、耗时短、特异性强、对设备需求低等特点,可与多种检测方法结合应用于食源性致病微生物的检测。作者旨在阐明LAMP的基本原理并归纳结合不同检测方法的LAMP技术在阪崎克罗诺杆菌快速检测中的研究进展。

    • 藤茶及二氢杨梅素的生物学功能研究进展

      2022, 41(2):8-21. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2022.02.002

      摘要 (1304) HTML (0) PDF 1.80 M (1353) 评论 (0) 收藏

      摘要:藤茶(vine tea)为葡萄科(Vitacea)蛇葡萄属(Ampelopsis michx. )显齿蛇葡萄(Ampelopsis grossedentata)植物的嫩茎叶经加工而成的茶制品。藤茶中含有丰富黄酮类物质,其中最主要成分为二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)。科学研究发现,藤茶及其主要活性成分具有抗癌、抗氧化、降脂、抗炎、抑菌和抗疲劳等作用,并且向一些重要基因和调控信号传导通路,参与不同的生物学功效,但其作用的分子机理尚不清楚。作者根据近年来国内外的最新研究进展,对藤茶及其主要活性成分的生物活性、调控的信号传导通路和作用的关键靶基因等进行了系统综述,以期为藤茶及其活性成分的深入研究提供理论参考,也有利于今后进一步对藤茶及其主要活性成分的开发利用。

    • 提取条件对蜂花粉粗多糖抗氧化能力的影响

      2022, 41(2):22-28. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2022.02.003

      摘要 (675) HTML (0) PDF 1.36 M (811) 评论 (0) 收藏

      摘要:为探究不同提取方式对蜂花粉粗多糖抗氧化活性的影响,采用热水浸提法提取蜂花粉粗多糖,研究了温度及乙醇体积分数对3种花粉中蜂花粉粗多糖提取率的影响;并根据邻苯三酚自氧化原理和芬顿原理检测了蜂花粉粗多糖对超氧阴离子和羟自由基的清除效果;最后,以经丙烯醛处理的大黄鱼肉为模型,通过测定蛋白质羰基质量摩尔浓度研究了蜂花粉粗多糖对大黄鱼肌原纤维蛋白质氧化的影响。结果表明:80 ℃提取的茶花花粉粗多糖对超氧阴离子的抗氧化活性最显著,乙醇体积分数对3种花粉粗多糖对超氧阴离子的清除效果差别显著,而对羟自由基的清除效果不显著。80 ℃、乙醇体积分数为95%时所提取的3种蜂花粉粗多糖均能使丙烯醛处理的大黄鱼肉肌原纤维蛋白中羰基质量摩尔浓度显著下降而总巯基质量摩尔浓度上升,且以野菊花粉粗多糖作用效果最佳。因此,蜂花粉粗多糖的抗氧化活性受提取温度和乙醇体积分数的影响,且蜂花粉粗多糖能够抑制蛋白质氧化,其中以野菊花粉粗多糖抗氧化效果最佳。

    • β-1,3-葡聚糖酶在枯草芽孢杆菌中的表达与性质

      2022, 41(2):29-36. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2022.02.004

      摘要 (530) HTML (0) PDF 1.20 M (664) 评论 (0) 收藏

      摘要:藤黄节杆菌(Athrobacter luteuβ-1,3-葡聚糖酶(βglⅠ)能够特异性的作用于β-葡聚糖中的β-1,3-糖苷键,在酵母裂解活性上具有突出优势,但是βglⅠ在生产上存在表达低、生产成本高的问题。作者利用无缝克隆技术构建表达载体,实现了βglⅠ在枯草芽孢杆菌中的分泌表达,并通过比较不同Tat类型和Sec类型信号肽、RBS、5′UTR等表达元件来提高βglⅠ的胞外产量。结果表明,信号肽SPLipA使得βglⅠ表达水平提高了0.4倍,在此信号肽基础上继续比较各RBS和5′UTR序列,其中cry3A 5′UTR使βglⅠ产量高出出发菌株1.2倍。此外,利用Ni2+亲和层析柱纯化βglⅠ并对其酶学性质进行研究,结果表明该酶的最适反应温度为50 ℃,最适反应pH为6.0,在0~45 ℃、pH 4.0~9.0的范围内稳定性较好,比活为973 U/mg。

    • 两阶段转速调控对纳豆芽胞杆菌合成维生素K2的影响

      2022, 41(2):37-45. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2022.02.005

      摘要 (685) HTML (0) PDF 1.87 M (810) 评论 (0) 收藏

      摘要:为进一步提高纳豆芽胞杆菌合成维生素K2的能力,根据前期不同转速对维生素K2产量影响的结果,在250 mL摇瓶中考察转速0(产量最大)和200 r/min(产量其次)对菌体生长和产物生成的影响。通过分析不同条件下发酵进程曲线与发酵动力学参数,并对不同时间点的发酵液进行稀释涂布和扫描电镜观察菌体形态变化,提出两阶段转速调控策略,并对影响此调控策略的条件(温度、转速、pH和时间)进行正交优化。0 r/min、108 h产量最高,发酵后期菌体形态多为褶皱,200 r/min菌体数量高于0 r/min,菌体在发酵后期破碎较多,少数表面平整;优化后在40 ℃、pH 6.5、0~36 h控制转速220 r/min,36~132 h转速为0 r/min,维生素K2的产量为(35.60±0.13) mg/L,比优化前(0、200 r/min)分别提高了1.67倍和9.674倍。分阶段调控转速可以有效提高纳豆芽胞杆菌合成维生素K2的能力,对维生素K2的大规模生产具有重要的指导意义和参考价值。

    • 米曲霉CPA毒素的5-氟色氨酸分子探针研究

      2022, 41(2):46-50. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2022.02.006

      摘要 (385) HTML (0) PDF 818.18 K (521) 评论 (0) 收藏

      摘要:米曲霉中往往含有完整的环匹阿尼酸(cyclopiazonic acid,CPA)毒素生物合成基因簇。鉴于CPAs对食品安全的潜在威胁和其不同的存在形式,依据CPA的生物合成机制推测可将外源氟代前体探针化合物嵌入CPA生物合成途径,从而形成氟代物用于靶向检测。结果显示,米曲霉CPA合成途径可以接受5-F-L-Trp为底物并经CpaS酶合成5-F-cAATrp。由于该化合物并不是其下游催化酶CpaD的合适底物,因而无法启动下游后修饰步骤,造成了5-F-cAATrp在菌株中富集。利用CPA生物合成途径对代谢产物的富集效应实现对CPA毒素更加方便和特异性的检测,这对于建立新型CPA毒素检测方法,保障食品安全具有积极意义。

    • 归芪多糖延缓大鼠脑组织衰老的作用机制

      2022, 41(2):51-57. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2022.02.007

      摘要 (668) HTML (0) PDF 1.59 M (665) 评论 (0) 收藏

      摘要:研究归芪多糖(GQP)延缓大鼠脑组织衰老的作用机制。将60只SD大鼠随机分为空白对照组(Control)、模型组(Model)、GQP低剂量组(LP)、GQP中剂量组(MP)、GQP高剂量组(HP)、阳性药物白藜芦醇组(Res)。采用皮下注射D-半乳糖(D-gal)建立大鼠衰老模型,实验组和阳性药物组分别给予GQP和 Res灌胃。测定脑组织中总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽(GSH)活性、丙二醛(MDA)和ATP质量摩尔浓度;苏木素-伊红(HE)染色观察脑组织病理学变化;检测线粒体膜电位变化以及线粒体膜肿胀程度;免疫组化法检测Bax和Bcl-2蛋白质的表达水平。结果发现:D-gal可致大鼠脑组织中T-SOD、GSH水平和ATP质量摩尔浓度明显降低,MDA质量摩尔浓度显著升高(P<0.05);GQP和Res逆转了上述指标(P<0.05);正常大鼠脑组织未呈现出明显的病理变化,模型大鼠细胞核明显变大、深染,GQP显著减轻了上述病灶;与正常组相比,模型组线粒体膜电位,ATP质量摩尔浓度和Bcl-2蛋白质表达水平显著降低(P<0.01),线粒体膜明显肿胀,Bax表达升高(P<0.01);GQP和Res明显提高了线粒体膜电位、ATP质量摩尔浓度及Bcl-2的表达(P<0.05),同时,减弱了线粒体膜的肿胀,降低了Bax表达(P<0.05)。因此,推测GQP可能通过减轻机体氧化损伤和改变线粒体功能发挥延缓衰老的作用。

    • 番茄不同成熟时期品质变化及可利用性研究

      2022, 41(2):58-66. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2022.02.008

      摘要 (986) HTML (0) PDF 2.00 M (803) 评论 (0) 收藏

      摘要:加工番茄在机械采收过程中混有约10%~20% 的未成熟果,由于未达到番茄酱等加工所要求的成熟度而被废弃,造成资源浪费。为了将这部分资源合理利用,作者对其品质特性进行系统性研究。选取IVF3535、8210、金番11、331共4个加工番茄品种,分别探究其在青熟期、变色期、坚熟期和完熟期等阶段成熟过程中与风味、营养相关的品质变化。结果表明,在成熟过程中,4种加工番茄干物质呈先降低后升高趋势,可溶性固形物与可溶性糖无明显变化,其中品种IVF3535的干物质、可溶性固形物和可溶性糖质量分数均优于其他3个品种。番茄红素、六氢番茄红素、八氢番茄红素和β-胡萝卜素的积累量显著上升,变色期时已有一定积累,而可滴定酸、番茄碱明显下降,且变色期后番茄碱质量分数与完熟期无显著性差异(P>0.05),因而处于变色期及变色期之后阶段的废弃番茄可挑选出再利用。该研究可为番茄加工产业对未成熟番茄的高效利用提供参考。

    • 人参皂苷Rg1对疲劳小鼠骨骼肌中TFAMNRF-1基因表达的影响

      2022, 41(2):67-72. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2022.02.009

      摘要 (665) HTML (0) PDF 1.37 M (697) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了研究人参皂苷 Rg1 对疲劳模型小鼠抗疲劳作用及骨骼肌中线粒体转录因子 A(TFAM)和核呼吸因子-1(NRF-1)基因表达的影响,选取 70 只雄性 BALB/c 小鼠随机分为7组,除空白组外,小鼠腹腔注射环磷酰胺,造成免疫低下模型后进行小鼠负重游泳力竭实验。ELISA 法测定小鼠肝脏及骨骼肌中疲劳相关指标的变化情况,RT-PCR 法检测小鼠骨骼肌中 TFAMNRF-1 基因表达水平。结果表明,人参皂苷 Rg1 中剂量组小鼠负重游泳的力竭时间最长,较空白组增加了 271.4%,且能显著增加肝糖原浓度。各剂量组小鼠肝脏 MDA 质量摩尔浓度下降,LDH 活性升高。中剂量人参皂苷 Rg1 可显著增加小鼠骨骼肌中 TFAM mRNA 和 NRF-1 mRNA 表达水平。人参皂苷 Rg1 可有效调节疲劳小鼠骨骼肌中疲劳相关生化指标的水平,具有较好的抗疲劳效果。

    • 硬脂酰乳酸钠对冻融循环发酵面团及其油炸甜甜圈品质的影响

      2022, 41(2):73-81. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2022.02.010

      摘要 (622) HTML (0) PDF 1.70 M (767) 评论 (0) 收藏

      摘要:作者研究了硬脂酰乳酸钠(Sodium stearyl lactate,SSL)对预醒发冷冻面团及其油炸甜甜圈品质的影响。将SSL加入自制发酵面团中,通过测定4次冻融循环后发酵面团的拉伸特性、流变学特性、可冻结水含量,以及冻融循环发酵面团油炸甜甜圈的比容、质构特性、表皮色泽、内部纹理结构、吸油率和水分损失率及感官评分,研究SSL对冻融循环发酵面团及油炸甜甜圈品质的影响。结果显示,与空白组对比,随着SSL添加量增加,冻融循环发酵面团拉伸性能和弹性模量先增加后降低,损耗角正切tanδ和可冻结水质量分数先降低后升高,冻融循环发酵面团油炸甜甜圈的硬度、黏度、咀嚼性先降低后升高,弹性、比容和感官评分先升高后降低,吸油率和水分损失率先降低后升高,其中最优SSL添加质量分数为0.2%,可使可冻结水质量分数降低8.16%,甜甜圈比容增加22.73%,吸油率降低5.39%。

    • 枯草芽孢杆菌普鲁兰酶基因的分泌表达及其在粉丝制作中的应用

      2022, 41(2):82-93. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2022.02.011

      摘要 (833) HTML (0) PDF 2.07 M (721) 评论 (0) 收藏

      摘要:作者旨在研究枯草芽孢杆菌普鲁兰酶的分泌表达及表达产物的应用性能。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168菌株的普鲁兰酶编码基因BsP分别在大肠杆菌(Escherichia coli)和枯草芽孢杆菌中进行表达,重组酶在两种宿主中均能利用自身结构分泌到细胞外。重组酶分泌到枯草芽孢杆菌细胞外的产物的酶学性质与积累在大肠杆菌胞质内的产物有明显的差异,分泌到枯草芽孢杆菌细胞外的重组酶BsBsP的比酶活为153.7 U/mg,是大肠杆菌胞质内产物的5.5倍。重组酶BsBsP最适pH为6.0,最适温度为45 ℃。重组酶BsBsP对直链淀粉无降解作用,为I型普鲁兰酶。在以土豆淀粉为原料的粉丝制作工艺中,以重组酶BsBsP水解芡糊淀粉可以有效降低粉丝断条率。枯草芽孢杆菌普鲁兰酶可利用自身结构实现高效分泌表达,重组酶适用于以淀粉为原料的粉丝制作。

    • 酿酒酵母产脂肪酸乙酯代谢途径改造

      2022, 41(2):94-105. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2022.02.012

      摘要 (798) HTML (0) PDF 2.91 M (691) 评论 (0) 收藏

      摘要:脂肪酸乙酯(fatty acid ethyl ester ,FAEE)是目前最具有潜力的新型能源,微生物细胞工厂生产FAEE比目前普遍的化学合成方法具有诸多优势,例如对环境污染小、生产成本低等。酿酒酵母具备良好的产乙醇和脂肪酰辅酶A的能力,我们试图通过改造酿酒酵母代谢途径来提高FAEE的前体——脂肪酰辅酶A的产量。通过引入根据酿酒酵母密码子优化的外源基因WS2(蜡酯合成酶基因)构建一条可以利用葡萄糖为底物、经过一系列反应生成FAEE的代谢通路。富集脂肪酰辅酶A需要进一步改造分支途径,例如阻断甾醇酯途径(ΔARE1、ΔARE2),三酰基甘油途径(ΔDGA1,ΔLRO1)和β氧化途径(ΔPXA2)来减少脂肪酰辅酶A的分流,从而相应的富集脂肪酰辅酶A。结果表明:3个途径的敲除大大增加了FAEE的产量,相较于在原始出发菌株BY4741中表达WS2即菌株BYW2增加了9倍,摇瓶产量达到11.72 mg/L。由于目的产物FAEE产量较低,在摇瓶发酵阶段进行了发酵优化,对是否添加乙醇和菜籽油、发酵时间以及乙醇添加模式这3个因素进行优化。结果表明:添加乙醇和菜籽油明显提升了FAEE产量,最佳发酵时间为60 h,乙醇添加模式为从20 h开始每间隔6 h补加发酵体积的2%,此时FAEE产量达到最高,为144.4 mg/L,是未优化前FAEE产量的12.3倍,是出发菌株BY4741中FAEE产量的480倍。为进一步提升FAEE产量,采用发酵罐发酵并对比了尿嘧啶缺陷菌株BYD5W2和尿嘧啶未缺陷菌株BYD5W2*的FAEE产量的差异,结果显示尿嘧啶缺陷菌株BYD5W2的FAEE最高产量为0.618 g/L,尿嘧啶未缺陷菌株BYD5W2*的FAEE最高产量为1.35 g/L,是目前报道的利用酿酒酵母产FAEE产量中较高的。

    • 层析填料中顽固色素去除的新方法研究

      2022, 41(2):106-111. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2022.02.013

      摘要 (1175) HTML (0) PDF 1.17 M (761) 评论 (0) 收藏

      摘要:对纯化工艺中因铁离子污染形成黄褐色的阴离子填料进行了研究。该色素在碱性条件下产生并加重,利用常规方法高盐、表面活性剂均无法清除。作者使用磷酸、醋酸、柠檬酸、盐酸进行测试,发现浓磷酸去除填料色素的能力高于柠檬酸,而浓醋酸和浓盐酸不能明显去除填料色素。基于上述结论,进一步研究磷酸在不同浓度和不同处理时间下对填料中色素的影响。结果发现,随着磷酸浓度的增加,铁离子质量浓度和载量相应增加;然而,随着孵育时间的延长,填料载量虽然相应增加,但是铁离子质量浓度却逐渐降低。由此推断,在磷酸处理填料色素的过程中,随着孵育时间的增加,铁离子可能与填料内腔的多孔结构发生二次吸附,使得溶液中的铁离子逐渐减少。通过数据分析结合颜色比较确定,0.5 mol/L磷酸孵育阴离子填料8.75~11.35 min可以显著去除铁离子带来的顽固色素问题,使得填料载量恢复如初,同时也避免相关杂质污染最终蛋白质产品。本研究的去除层析填料杂质的新方法可为相关生物制品在下游工业化领域中降本增效提供参考。

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