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人体中可溶性VEGFR-2酪氨酸激酶在大肠杆菌中的表达、纯化及活性测定
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Purification and Identification of the Soluble VEGFR-2 Kinases Expressed in Escherichia coli
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    摘要:

    针对人体血管内皮生长因子受体2(Vascular endothelial growth factor receptor 2,VEG-FR-2)受体型酪氨酸激酶(Receptor tyrosine kinase,RTK)进行体外表达,并对表达和纯化条件进行优化。构建表达VEGFR-2酪氨酸激酶重组大肠杆菌,通过研究不同诱导温度、IPTG浓度、诱导时间和超声条件等对蛋白表达的影响,采用Ni-NTA亲和层析法、Western Blot法ELISA方法对重组蛋白进行纯化、鉴定和活性测定。成功地将1 000 bp左右的VEGFR-2酪氨酸激酶DNA片段插入载体pQE30中,在优化条件下重组蛋白较好地可溶性表达。SDS-PAGE表明重组蛋白相对分子质量约为36 000,与预期一致,Western Blot分析表明它能与抗Flk-1和抗His抗体特异反应,ELISA检测结果表明重组蛋白具有利用ATP催化底物磷酸化的激酶活性。通过重组DNA技术使人体VEGFR-2酪氨酸激酶在大肠杆菌得到可溶性表达,纯化重组蛋白具有较高的活性。

    Abstract:

    To improve the soluble expression of VEGFR-2 tyrosine kinase in Escherichia coli for further study on its biological activity.Different concentrations of IPTG,inducing times and temperatures are used to optimize the expression condition for the soluble recombinant VEGFR-2 tyrosine kinase in Escherichia coli.The recombinant protein is purified by affinity chromatography.Western Blot was used to identify this protein.The recombinant plasmid pQE30-TK encoding VEGFR-2 tyrosine kinase was constructed and soluble VEGFR-2 tyrosine kinase was expressed.SDS-PAGE analysis showed that the molecular mass of VEGFR-2 tyrosine kinase was about 36 000 as expected and Western blot analysis indicated that both antibodies for anti-Flk-1 and anti-His could react against the purified protein.Conclusion: The soluble human VEGFR-2 tyrosine kinase was expresses in Escherichia coli by the recombinant technique.The purified protein showed biological activity.

    参考文献
    相似文献
    引证文献
引用本文

徐娟,王柯,杨润琳,黄飚,段作营,李华钟.人体中可溶性VEGFR-2酪氨酸激酶在大肠杆菌中的表达、纯化及活性测定[J].食品与生物技术学报,2011,30(3):475-480.

XU Juan, WANG Ke, YANG Run-lin, HUANG Biao, DUAN Zuo-ying, LI Hua-zhong. Purification and Identification of the Soluble VEGFR-2 Kinases Expressed in Escherichia coli[J]. Journal of Food Science and Biotechnology,2011,30(3):475-480.

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  • 在线发布日期: 2014-06-17
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