易错PCR技术提高中性内切葡聚糖酶活性

doi:10.3969/j.issn.1673-1689.2013.07.013

首页 > 过刊浏览>2013年第32卷第7期 >754-761. DOI:10.3969/j.issn.1673-1689.2013.07.013

易错PCR技术提高中性内切葡聚糖酶活性
DOI:
                        10.3969/j.issn.1673-1689.2013.07.013
                    
作者:
                        
                        
                    
作者单位:
作者简介:
通讯作者:
中图分类号:
基金项目:四川省科技支撑计划项目(2008Z0150)

Improving Endoglucanase Activity from Bacillus subtilis by Error-Prone PCR

Author:

Affiliation:

Fund Project:

摘要

图/表

访问统计

参考文献

相似文献

引证文献

资源附件

文章评论

摘要:

近年来随着纤维素酶在食品加工工业中具有广阔应用前景,而纤维素酶的工业应用一直受酶活性低,成本高的限制。为了提高中性内切葡聚糖酶的活性,作者利用易错PCR技术对来自枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)C-36的内切葡聚糖酶基因进行定向进化研究,构建了在大肠杆菌中的突变体库。通过刚果红平板筛选,获得了酶活性提高的突变株F-10,活力比亲本酶提高4.2倍。序列分析表明:F-10有5个碱基发生突变,两个氨基酸突变:D212V和T307S。SDSPAGE条带,表明基因表达正确,而表达量较原始菌株显著增加。酶学性质分析,表明该酶的最适反应pH为5.6,最适反应温度为45℃,在pH 4.5~10.0范围内50℃保温30 min可保持80%的剩余酶活,在60~75℃酶活力相对稳定,可保持在最高酶活的80%以上,当温度高于75℃时,酶开始变性失活,酶活力迅速下降。研究获得了酶活性提高的内切葡聚糖酶菌株,为进一步在分子水平研究内切葡聚糖酶的功能和其应用打下了基础,也为高酶活酶分子在其他高表达系统的表达提供了基础材料。

Abstract:

Endoglucanase cooperates with cellobihydrolase and β-1,4-glucosidase to translate cellulose to glucose completely.Now lots of researchers found that low enzymatic activity and high cost are the two main problems that restrict the industrial applications for cellulase.In order to enhance the enzymatic activity of the neutral endoglucanase activity,error-prone PCR strategy was conducted on Bacillus subtilis C-36 endoglucanase gene.The mutant F-10 with endoglucanase activity improved 4.2 folds respectively were obtained.The sequence of F-10 showed five nucleotides substitutions to two mutated amino acids.SDS-PAGE showed genes are correctly expression.Enzymatic properties of mutant F-10 showed that:The optimal temperature and pH value changed compared with the original enzyme,it’s optimal temperature and pH is 45 ℃ and 5.6,respectively.The enzyme maintained over 80% of the original enzymatic activity after incubated from pH 4.5 to 10.0 at 50 ℃ for 30 min and the enzyme maintained over 80% of the original enzymatic activity in 60~75℃,but when temperature upon 75 ℃,then enzymatic activity decreased sharply.

参考文献

相似文献

引证文献

引用本文

唐自钟,刘姗,韩学易,姚友旭,刘默洋,陈惠,晋海军,吴琦,单志.易错PCR技术提高中性内切葡聚糖酶活性[J].食品与生物技术学报,2013,32(7):754-761.

TANG Zi-zhong, LIU Shan, HAN Xue-yi, YAO You-xu, LIU Mo-yang, CHEN Hui, JIN Hai-jun, WU Qi, SHAN Zhi. Improving Endoglucanase Activity from Bacillus subtilis by Error-Prone PCR[J]. Journal of Food Science and Biotechnology,2013,32(7):754-761.

复制

文章指标

点击次数:
下载次数:
HTML阅读次数:
引用次数:

历史

收稿日期:
最后修改日期:
录用日期:
在线发布日期: 2014-06-17
出版日期:

地址：江苏省无锡市蠡湖大道1800号邮政编码：214122

电话：0510-85913526 电子邮件：xbbjb@jiangnan.edu.cn

技术支持：北京勤云科技发展有限公司

引用本文

分享

文章指标

历史

微信公众号二维码

手机版网站二维码