耐热木聚糖酶基因xyn11EM在大肠杆菌中的表达

doi:10.3979//j.issn.1673-1689.2016.09.006

首页 > 过刊浏览>2016年第35卷第9期 >935-940. DOI:10.3979//j.issn.1673-1689.2016.09.006

耐热木聚糖酶基因xyn11EM在大肠杆菌中的表达
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                        10.3979//j.issn.1673-1689.2016.09.006
                    
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Expression of the Thermotolerant Xylanase Gene xyn11EM in Escherichia coli

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将人工合成经密码子优化的11家族耐热木聚糖酶基因xyn11EM克隆至表达质粒pET-28a（+）中，获得重组质粒pET-28a-xyn11EM。将其转化Escherichia coli BL21（DE3），构建表达耐热木聚糖酶的重组工程菌E. coli BL21/xyn11EM。用IPTG诱导表达重组木聚糖酶Xyn11EM（reXyn11EM），酶活性可达47.5 U/mL。SDS-PAGE分析显示，reXyn11EM的表观相对分子质量为24 800。reXyn11EM的最适反应温度为70 ℃，在70 ℃以下稳定。最适反应pH为6.5~7.0，在pH 5.0~8.0范围内稳定。大多数金属离子和EDTA对该重组酶的活性影响不大。reXyn11EM的Km和Vmax值分别为7.2 mg/mL和54.7 U/mg。结果表明xyn11EM成功在E. coli 中实现了异源表达，其良好的热稳定性具有较好的工业应用潜力。

Abstract:

A codon-optimized gene（named xyn11EM），which encodes a thermotolerant xylanase belonging to the glycoside hydrolase family 11，was synthesized，and cloned into the expression plasmid pET-28a（+）. The recombinant Escherichia coli（designated E. coli BL21/xyn11EM），expressing the thermostable xylanase，was constructed by transforming the recombinant plasmid，pET-28a-xyn11EM，into E. coli BL21（DE3）. The recombinant E. coli BL21/xyn11EM was induced with IPTG to express reXyn11EM. The reXyn11EM activity reached 47.5 U/mL. The apparent molecular weight of reXyn11EM was estimated to be 24 800 by SDS-PAGE analysis. Its optimal temperature and pH were 70 ℃ and 7.0，respectively. It was stable at a temperature of 70 ℃ or below，and at a pH range of 5.0~8.0. Its activity was not significantly affected by most of metal ions tested and EDTA. The Km and Vmax of reXyn11EM toward birchwood xylan were 7.2 mg/mL and 54.7 U/mg. The excellent thermostability of reXyn11EM make it has great potential in industrial application.

参考文献

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引用本文

何瑶,殷欣,吴芹,邬敏辰.耐热木聚糖酶基因xyn11EM在大肠杆菌中的表达[J].食品与生物技术学报,2016,35(9):935-940.

HE Yao, YIN Xin, WU Qin, WU Minchen. Expression of the Thermotolerant Xylanase Gene xyn11EM in Escherichia coli[J]. Journal of Food Science and Biotechnology,2016,35(9):935-940.

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