吡咯喹啉醌高通量检测方法的建立与优化

doi:10.3969/j.issn.1673-1689.2017.02.002

首页 > 过刊浏览>2017年第36卷第2期 >122-128. DOI:10.3969/j.issn.1673-1689.2017.02.002

吡咯喹啉醌高通量检测方法的建立与优化
DOI:
                        10.3969/j.issn.1673-1689.2017.02.002
                    
作者:
                        
                        
                    
作者单位:
作者简介:
通讯作者:
中图分类号:Q814
基金项目:

Establishment and Optimization of the High-Throughput Measurement of Pyrroloquinoline Quinone

Author:

Affiliation:

Fund Project:

摘要

图/表

访问统计

参考文献

相似文献

引证文献

资源附件

文章评论

摘要:

吡咯喹啉醌（Pyrroloquinoline quinone，PQQ）是一种新型辅酶，具有广阔的应用前景。传统PQQ检测方法在检测发酵液中PQQ浓度时都存在一定的缺陷，且检测效率偏低。本研究在大肠杆菌（Escherichia coli BL21（DE3））中表达E. coli K-12来源的葡萄糖脱氢酶（PQQGDH），并通过亲和层析分离纯化PQQGDH，得到了高浓度、高纯度的PQQGDH。通过酶液和PQQ样品用量的双因素正交实验对传统重组酶法的反应体系加以改进，得到适用于96孔板高通量检测的反应体系。结果表明30 ?滋L纯化后酶液、2 ?滋L PQQ样品配合1.2 mL的显色剂组成的显色体系检测效果最佳。该方法线性范围大且具有较高的精确度和重现性。本研究中利用高浓度、高纯度的PQQGDH配合96孔板和酶标仪，所建立的PQQ高通量检测方法，不仅降低了实验误差，而且大幅提高了PQQ发酵液样品的检测效率。

Abstract:

Pyrroloquinoline quinone（PQQ） is a new coenzyme that has broad application prospect. Previous methods used for measuring PQQ in fermentation broth are defective and low-efficient. In this study，D-glucose dehydrogenase（PQQGDH） from Escherichia coli K-12 was expressed in E. coli BL21 and then purified by the nickel-affinity chromatography column. For the high-throughput measurement of PQQ the optimal reaction system was found by orthogonal experiment to contain 30 μL PQQGDH，2 μL PQQ sample and 1.2 mL chromogenic reagent. The method was linear within a wide range and had high precision and good reproducibility. Compared with traditional methods，the high-throughput measurement of PQQ using purified PQQGDH，96-well plate and microplate reader are herein more accurate and efficient.

参考文献

相似文献

引证文献

引用本文

夏雨,周景文,陈坚.吡咯喹啉醌高通量检测方法的建立与优化[J].食品与生物技术学报,2017,36(2):122-128.

XIA Yu, ZHOU Jingwen, CHEN Jian. Establishment and Optimization of the High-Throughput Measurement of Pyrroloquinoline Quinone[J]. Journal of Food Science and Biotechnology,2017,36(2):122-128.

复制

文章指标

点击次数:
下载次数:
HTML阅读次数:
引用次数:

历史

收稿日期:
最后修改日期:
录用日期:
在线发布日期: 2017-04-28
出版日期:

地址：江苏省无锡市蠡湖大道1800号邮政编码：214122

电话：0510-85913526 电子邮件：xbbjb@jiangnan.edu.cn

技术支持：北京勤云科技发展有限公司

引用本文

分享

文章指标

历史

微信公众号二维码

手机版网站二维码