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文章摘要
Bacillus altitudinis SYBC hb4碱性β-葡萄糖苷酶基因的克隆表达及酶学性质的研究
Cloning,Experssion and Characterization of Alkali-Stable β-Glucosidase from Bacillus altitudinis SYBC hb4
  
DOI:10.3969/j.issn.1673-1689.2017.11.012
中文关键词: 碱性β-葡萄糖苷酶  大肠杆菌  基因克隆  酶学性质  高地芽孢杆菌
英文关键词: alkali-stable β-glucosidase,Escherichia coli,clone,characterization,Bacillus altitudinis SYBC hb4
基金项目:
作者单位
刘群 江南大学 工业生物技术教育部重点实验室江苏 无锡 214122
江南大学 生物工程学院江苏 无锡214122 
管政兵 江南大学 工业生物技术教育部重点实验室江苏 无锡 214122
江南大学 生物工程学院江苏 无锡214122 
蔡宇杰 江南大学 工业生物技术教育部重点实验室江苏 无锡 214122
江南大学 生物工程学院江苏 无锡214122 
廖祥儒 江南大学 工业生物技术教育部重点实验室江苏 无锡 214122
江南大学 生物工程学院江苏 无锡214122 
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中文摘要:
      为获得耐碱性β-葡萄糖苷酶,进一步研究碱性β-葡萄糖苷酶的酶学性质。从实验室已有蜂蜜中筛选出一株耐碱性的高地芽孢杆菌Bacillus altitudinis SYBC hb4,根据Bacillus altitudinis SYBC hb4中β-葡萄糖苷酶(bglA)基因序列设计一对引物,通过PCR扩增技术,获得β-葡萄糖苷酶基因(bglA),将扩增后的bglA与质粒pColdII构建重组表达载体pColdII-bglA,并转化至大肠杆菌E. coli BL21(DE3)中表达。重组表达的β-葡萄糖苷酶酶活可达12.40 U/mL;该重组β-葡萄糖苷酶最适反应温度为60 ℃;最适反应pH值为pH 8.0;5 mmol/L的Mg2+可使酶活提高50%左右。本实验所获得的碱性β-葡萄糖苷酶比已报道的重组酶在碱性条件下稳定性更好。
英文摘要:
      In order to obtain alkali-stable β-glucosidase and study its enzyme characterization,an alkali-stable strain Bacillus altitudinis SYBC hb4 was screened and isolated from native honey. Based on the β-glucosidasecoding sequences from Bacillus altitudinis SYBC hb4,design up and downstream oligonucleotide primers were designed,and the target gene(bglA) was amplified by using PCR.The expression vector pColdII-bglA was constructed by subcloning the target gene into plasmid pColdII,and then transformed into E. coli BL21(DE3)for heterogeneous expression.The expression β-glucosidase acticity reached to 12.40 U/mL. The optimum temperature and pH of the recombinant β-glucosidase were 60 ℃ and 8.0,respectively. And 5mmol/L Mg2+ could increased 50% β-glucosidase activity.
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