重组融合蛋白MBP-PAI的表达、纯化及酶活测定

doi:10.3969/j.issn.1673-1689.2020.02.002

首页 > 过刊浏览>2020年第39卷第2期 >10-15. DOI:10.3969/j.issn.1673-1689.2020.02.002

重组融合蛋白MBP-PAI的表达、纯化及酶活测定
DOI:
                        10.3969/j.issn.1673-1689.2020.02.002
                    
作者:
                        
                        
                    
作者单位:
作者简介:
通讯作者:
中图分类号:Q786
基金项目:

Expression, Purification and Enzyme Activity Determination of Recombination Fusion Protein MBP-PAI

Author:

Affiliation:

Fund Project:

摘要

图/表

访问统计

参考文献

相似文献

引证文献

资源附件

文章评论

摘要:

为了解决亚油酸异构酶（Linoleic Acid Isomerase，PAI）在大肠杆菌中形成包涵体的问题，选择麦芽糖结合蛋白（Maltose-Binding Protein，MBP）标签和低温诱导表达系统pColdV，构建了大肠杆菌重组表达菌株E.coli BL21(pCold-Mpai)，并对其诱导表达条件进行了优化。SDS-PAGE电泳结果显示，融合蛋白MBP-PAI成功表达，重组菌的最佳诱导表达条件为：诱导温度15 ℃、IPTG添加量0.1 mmol/L 、诱导时间12 h，在该诱导条件下，与未融合MBP的PAI相比，MBP-PAI的可溶性表达量为后者的18倍、酶活为后者的1.5倍。经过 MBPTrap HP亲和层析柱纯化后，MBP-PAI纯蛋白质的比酶活为1.58 U/mg，能够转化亚油酸形成反10，顺12-共轭亚油酸。

Abstract:

In order to reduce the inclusion bodies of the linoleic acid isomerase（PAI）in Escherichia coli，a recombinant expression strain E.coli BL21（pCold-Mpai）was constructed by using maltose-binding protein（MBP）and low temperature induced expression system pColdV，and its induction conditions were optimized. SDS-PAGE showed that the fusion protein MBP-PAI was successfully expressed，and the best induction conditions were: induction temperature 15 ℃，IPTG 0.1 mmol/L and induction time 12 h. Under the best induction conditions，the soluble expression and enzyme activity of MBP-PAI was 18 times and 1.5 times that of PAI，respectively. After purification by MBPTrap HP affinity chromatography column，the enzyme activity of MBP-PAI was 1.58 U/mg，which could convert linoleic acid to trans10，cis12-conjugated linoleic acid.

参考文献

相似文献

引证文献

引用本文

黄昕畑,张白曦,陈海琴,张灏,陈卫.重组融合蛋白MBP-PAI的表达、纯化及酶活测定[J].食品与生物技术学报,2020,39(2):10-15.

HUANG Xintian, ZHANG Baixi, CHEN Haiqin, ZHANG Hao, CHEN Wei. Expression, Purification and Enzyme Activity Determination of Recombination Fusion Protein MBP-PAI[J]. Journal of Food Science and Biotechnology,2020,39(2):10-15.

复制

文章指标

点击次数:
下载次数:
HTML阅读次数:
引用次数:

历史

收稿日期:
最后修改日期:
录用日期:
在线发布日期: 2020-05-18
出版日期:

地址：江苏省无锡市蠡湖大道1800号邮政编码：214122

电话：0510-85913526 电子邮件：xbbjb@jiangnan.edu.cn

技术支持：北京勤云科技发展有限公司

引用本文

分享

文章指标

历史

微信公众号二维码

手机版网站二维码